毛细管电泳手性手性拆分法分离制备酮康唑和益康唑.docxVIP

毛细管电泳手性手性拆分法分离制备酮康唑和益康唑 药物在药物、临床和科学知识中的分布具有重要意义。高效毛细管电泳技术 (HPEC) 在手性分离方面显示出其他方法不可比拟的优越性。在毛细管电泳手性拆分的模式中, 添加手性选择剂的毛细管区带电泳 (CZE) 是最常用的手性分离方法。其中最常用的手性选择剂是环糊精及其衍生物, 而带负电的环糊精, 特别是硫酸化环糊精应用于各类对映体的手性拆分均获得良好的分离效果。有关手性药物的拆分研究很多, 但对康唑类药物的手性分离研究较少, 本研究以高度硫酸化-β-环糊精作为手性选择剂, 对2种康唑类抗真菌药物酮康唑和益康唑进行手性对映体拆分, 建立了简单、快捷的康唑类药物的手性拆分方法。 1 表面活性剂及分析方法 P/ACE MDQ 高效毛细管电泳仪 (Beckman-coulter Fullerton, CA, USA) ;未涂层石英毛细管柱;酮康唑和益康唑消旋体由浙江省药品检验所提供;HS-β-环糊精 (Fluka Chemic GmbH CH一9471 Buchs, 瑞士) ;磷酸、三乙醇胺均为分析纯;水为注射用水。 2 带缓冲液毛细管的制备 未涂渍石英毛细管柱 (57 cm×375 μm ×50 μm, 有效长度50 cm) ;背景电解质为25 mmol·L-1的磷酸缓冲液, 用三乙醇胺调节pH至3.5;手性添加剂为10 mmol·L-1HS-β-环糊精;运行电压为-20 kV;毛细管温度为20 ℃;检测波长214 nm, 采用压力进样, 0.5 Psi, 进样10 s。每次试验前毛细管用0.1 mmol·L-1氢氧化钠和水各冲洗0.5 h, 然后用运行缓冲液平衡10 min, 2次进样之间, 用缓冲液平衡3 min。对映体的分离图谱见图1。 3 结果与讨论 3.1 硫酸化环糊精包合物的作用机理 环糊精是由7个葡萄糖单元通过1, 4-糖苷键连结而成, 呈环状结构, 并且具有疏水的内空腔和亲水的外表面。而硫酸化环糊精是将羟基用硫酸基取代, 使环糊精空腔的开口端引入新的电性作用和离子交换作用, 从而增强手性识别能力, 同时由于硫酸化环糊精在所有pH条件下, 均为带负电, 而本实验中酮康唑和益康唑在低pH条件下带正电, 使用硫酸化环糊精反向电压的分离模式, 带正电的药物离子受到强负电性硫酸化环糊精的包合作用, 随之向正极迁移, 有利于硫酸化环糊精与对映体充分作用。因此, 本实验选择HS-β-环糊精作为手性添加剂, 并对HS-β-环糊精添加浓度进行考察, 结果表明浓度以10 mmol·L-1为最佳, 当浓度过大时, 基线不易稳定, 谱峰展宽。 3.2 ph对分离比的影响 缓冲液的pH可以影响电渗流的大小, 待分析物质的电离情况和环糊精的电荷分布情况, 因此改变缓冲液pH可以改善手性药物的分离情况。在本实验中考察了缓冲液pH为2.5, 3.0, 3.5条件下, 酮康唑和益康唑的对映体分离情况。结果表明在3种pH条件下, 酮康唑和益康唑的对映体均能达到分离, 随着pH值的增加, 分离度增大。这可能是因为在酸性条件下, 酮康唑和益康唑完全质子化, EOF被抑制, 运用逆向电泳操作 (进样端为负极, 检测端为正极) , 有利于阴离子环糊精的手性识别。当pH2.5时, EOF几乎被完全抑制, 随着pH增加, EOF值也增加, 而HS-β-环糊精与手性化合物的包和物是向正极移动, EOF往负极移动, 两者综合作用结果, 使酮康唑和益康唑的对映体的分离度增大。 3.3 温度和时间对分离效果的影响 在分离过程中, 随着所加电压的升高, 迁移速度变快, 所需的分离时间变短, 但对分离效果的影响比较小。而温度对分离的影响也比较小。因此, 本实验选择的温度为20 ℃, 电压为-20 kV, 使2种药物的对映体得到了基线分离。 4 酮康唑和益康唑对把酮康唑和益康唑对把sdc作为研磨出形貌的药物 本实验建立的以HS-β-环糊精为手性选择剂的酮康唑和益康唑对映体拆分的HPCE手性分析法, 经济、有效、快捷, 可用于酮康唑和益康唑对映体手性分离。