尿感宁颗粒无糖型质量控制方法的建立.docxVIP

尿感宁颗粒无糖型质量控制方法的建立 尿感宁由海金沙藤、连金草、凤尾草、甘薯和紫花地黄组成。卫生标准第五卷（标准编号：ws3-b-0999-91）。它具有清热解毒、利尿和全身清洗的功效。它被用来治疗膀胱湿热引起的淋病。症状包括尿频、尿急、尿涩、尿黄、尿样等。但尿感宁颗粒现行标准中仅有性状鉴别和颗粒剂的常规检查,质量标准不完善,难以有效控制该品种的质量。本研究建立了尿感宁颗粒(无糖型)中连钱草和凤尾草的薄层色谱鉴别方法,同时建立了以高效液相色谱法测定紫花地丁中秦皮乙素含量的定量方法,为该制剂质量标准的建立提供了可行的方法及依据。 1 药品与试剂苯乙素的联动 Aglient1100液相色谱仪,包括G1311 A四元泵,G1322 A脱气机,G1313 A自动进样器,G1314 A紫外可见检测器,G1316A柱温箱。紫外分光光度计为TU-1901;秦皮乙素对照品(批号110741-200506,供含量测定用),连钱草对照药材(批号121386-200401),凤尾草对照药材(批号121312-200301);均由中国药品生物制品检定所提供;尿感宁颗粒(无糖型)批号为0701003,0707011,0803007,均由市场购得,方法学考察选用样品的批号为0701003;硅胶G薄层板(青岛海洋化工);甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 供试品溶液及对照药材溶液制备 取本品1袋,研细,加甲醇50 mL,水浴回流1 h,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加水20 mL使溶散,用乙酸乙酯振摇提取2次,每次20mL,合并乙酸乙酯液,水浴蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。另取连钱草对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。吸取上述2种溶液各1μL,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸-甲醇-水(2∶1∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视,在与对照药材色谱主斑点相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。缺味无干扰,见图1。 2.2 对照药材的制备 取连钱草薄层色谱鉴别项下的供试品溶液,作为凤尾草鉴别用供试品溶液。另取凤尾草对照药材1 g,同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。吸取供试品溶液和凤尾草对照药材溶液各10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-丙酮-乙酸乙酯(5∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。在与对照药材色谱主斑点相应的位置上,显相同颜色的斑点。缺味无干扰,见图2。 2.3 秦皮乙素的含量 2.3.1 条件1 2.3.2 对照溶液的制备 2.3.3 试验溶液的制备 2.3.4 原料不足 2.2.5 方法论的特殊性 2.2.6 线性域 2.2.7 重复试验 2.2.8 返回率测试 2.2.9 样品含量的测量 3 讨论 3.1 高效鉴别鉴别 文献有以熊果酸对照品为对照进行鉴别,由于熊果酸在植物药中广泛存在,专属性意义不大,同时考虑到连钱草的临床使用中存在同名异物、混用或误用的可能性较大,虽然文献报道连钱草含有有机酸、萜类以及黄酮类化合物,但对这些成分是否在尿感宁颗粒中为连钱草特有成分,目前尚不清楚,为了更好地与混伪品相区分,在薄层色谱鉴别中采用了连钱草的对照药材作为对照,经验证方法具有较好专属性。 3.2 检测波长的确定 试验中测得秦皮乙素在流动相中的紫外最大吸收波长为344.5 nm,考虑到光谱扫描曲线上在345 nm处较平坦,结合文献,确定检测波长为345 nm。 3.3 提取溶剂和提取时间的选择 由于处方中有5味药,均为水加热提取,成分较为复杂,在秦皮乙素含量测定方法建立中,对主要影响因素进行考察。选择提取溶剂时,曾考察用不同浓度甲醇、不同浓度的乙醇进行提取,结果以60%甲醇作为提取溶剂时,其样品中秦皮乙素提取较完全;在提取方法考察时,以60%的甲醇为溶剂,比较超声和回流两种方法,试验显示回流的方法提取完全;比较不同回流提取时间,结果是回流1.5 h时基本提取完全,故确定回流提取和时间为1.5 h;同时对萃取是否完全进行考察:取含量测定项下经乙酸乙酯提取4次后的溶液,继续用乙酸乙酯振摇提取2次,每次20 mL,合并乙酸乙酯液,水浴蒸干,残渣以60%甲醇转移5m L量瓶中,加60%甲醇至刻度,摇匀,按上述色谱条件进样20μL,结果色谱图中在与对照品保留时间相一致的地方未见色谱峰,认为正文中含量测定项下乙酸乙酯萃取转移完全。 3.4 本实验结果的测定 采用了不同的流动相。在甲醇-0.5%磷酸(22∶78)条件下,色谱分离完全,峰形对称,而且在选定的检测波长下,其他成分的吸收较弱,有利于秦皮乙素的测定。 由于市场上已难以见到含糖型的制剂,故本方法仅针对尿感宁颗粒(无糖型)目前质控指标少而研究,经方法学验证,认为对连钱草和凤