枳实消痞丸对幽门螺杆菌感染小鼠胃黏膜fas表达的影响.docxVIP

枳实消痞丸对幽门螺杆菌感染小鼠胃黏膜fas表达的影响 幽门螺杆菌（hp）是世界上最常见的感染原因之一。大量资料显示Hp感染与胃、十二指肠疾病关系极为密切。在多数国家,超过90%的十二指肠溃疡患者和将近70%的胃溃疡患者伴有Hp感染。目前Hp作为慢性活动性胃炎主要的发病原因已被认识,并且被认为与胃癌的发生有密切关系。1994年,Hp已被世界卫生组织定为Ⅰ类致癌物。临床上已肯定慢性活动性胃炎患者的胃黏膜中Hp的检出率可高达90%以上,经Hp敏感的抗菌药物治疗后,在Hp消失的同时伴有胃黏膜组织学的改善及症状的好转。因此根除Hp是治疗慢性胃炎、消化性溃疡和预防胃癌的重要环节。 在西药治疗Hp感染方面,虽然目前国际上推崇的三联疗法具有较高的根除率,但由于耐药株的出现,导致治疗失败率增加。另外,三联治疗可出现恶心、呕吐、食欲减退及腹泻等不同程度的副作用,据报道有5%~20%的患者因不能耐受而停止治疗。中医药在治疗幽门螺旋杆菌感染相关性慢性胃炎方面取得了一定进展,但也存在着侧重解毒祛邪,或者单方面辅助正气,忽视益气散滞、扶正去邪的倾向。 根据中医理论,我们认为“气虚标实”是幽门螺旋杆菌感染相关性慢性胃病的主要病机。鉴此,本实验以Hp感染的BALB/c小鼠为研究对象,以胃黏膜损伤程度、细胞凋亡指数和Fas蛋白表达水平为指标,评价枳实消痞丸配合西药的治疗效果,并与单用西药、中药组进行比较,以期寻找更有效的根除Hp治疗方案。 1 材料表面 1.1 小鼠精子pf 54只无特殊病原菌(Specific pathogen free,SPF)雌性BALB/c小鼠,7~8周龄,体重26~31 g,由河南省实验动物中心提供,许可证号SYXK(豫)2005-0012。动物实验在郑州大学医学院无菌动物房进行,饲养和实验条件符合SPF级动物要求。 1.2 大学医学视角 实验用Hp菌株为国际标准菌株SS1(Sydney strain 1)(获赠于郑州大学医学院)。将保存于-80℃的Hp菌株SS1涂布于布氏琼脂培养基,在一定湿度(98%)、微需氧(5%O2,8%CO2,80%N2)、37℃培养72 h后,从菌落形态、尿素酶试验、硝酸盐试验、革兰染色等方面对Hp感染的有无及其程度进行鉴定。 1.3 试剂与检测试剂盒 枳实消痞丸按照原方剂量(枳实、干姜、厚朴、黄连、姜半夏、人参、茯苓、白术、制甘草、麦芽)水煎提取,甲硝唑片(山西亚宝药业集团股份有限公司,批号050528),枸橼酸铋钾胶囊(郑州韩都药业集团有限公司,批号050316),阿莫西林胶囊(广州白云山制药有限公司,批号4050345),凋亡指数(AI)检测试剂盒、Fas检测试剂盒、Bcl-2检测试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司(批号200409),胃幽门螺杆菌诊断p H指示剂法诊断试剂盒(福建三强生物化工有限公司,批 1.4 仪器 无菌操作台(苏州净化设备有限公司)、电热恒温培养箱(天津市华北实验仪器有限公司)、光学显微镜(Olympus-CH20)。 2 方法 2.1 胃黏膜组织病理学检测 取7~8周龄雌性BALB/c小鼠,禁食不禁水12 h后,ig 5%Na HCO30.2 m L/只,30 min后ig 1×109CFU·L-1的Hp菌液0.5 m L,6 h后予以投食,隔日1次,连续3次。造模后1,2周,禁食12 h后各处死造模小鼠2只,取全胃,沿大弯剪开,用生理盐水漂洗。取1/2胃黏膜组织行快速尿素酶试验及幽门螺杆菌培养(接种时直接将胃黏液面与布氏肉汤琼脂培养基接触,涂抹),另取1/2胃组织用10%甲醛溶液固定、石蜡包埋切片后行HE染色。根据“中华医学会第二届全国Hp专题研讨会”确定的Hp科研诊断标准,尿素酶试验、细菌培养、HE染色检测阳性者,为造模成功。 2.2 阿莫西林、枳实消菌丸、模型组、空白对照组出现所有实行生活的罪犯所有饮食见表1 取Hp造模成功小鼠40只,随机分为中西药联用组(枳实消痞丸24.6 g·kg-1·d-1+西药三联)、中药组(枳实消痞丸24.6 g·kg-1·d-1)、西药组(西药三联,即枸橼酸铋钾72.08 mg·kg-1·d-1、阿莫西林300.33 mg·kg-1·d-1、甲硝唑150.17 mg·kg-1·d-1)、模型组、空白对照组(正常饮食),连续给药14 d。 2.3 提交材料 末次投药后,禁食12 h,颈椎脱臼法处死小鼠,取全胃,沿大弯剪开,取1/2胃组织用4%多聚甲醛溶液固定,常规石蜡包埋制片。 2.4 指标报告 2.4.1 组织病理学检测 胃黏膜切片,HE染色,光镜下观察病理组织学改变。参考Eric法,计算胃黏膜损伤指数(lesion index,LI):胃黏膜浅层未见明显病变为0分;病变限黏膜浅层上1/3、上皮细胞变性、黏膜充血水肿