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棉花立枯病木霉菌的药剂防治试验 木霉菌具有广阔的光谱、广泛的适应性和多机制性，一直是植物疾病防控的重要对象。木霉菌的作用机制几乎包括了所有可能机制,如抗菌素的杀菌作用,重寄生作用,溶菌作用,诱导抗病性和竞争作用。木霉菌产生十分复杂的几丁质酶和葡聚糖苷酶,破坏植物病原真菌的细胞壁,如从哈茨木霉菌中提纯了的一个β-1,3-葡聚糖酶,能阻止B.cierea分生孢子萌发,芽孢管延长并裂解其细胞壁;而在重复寄生过程中几丁质酶发挥着重要作用。平板抗菌活性、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶容易标准化操作,而且是木霉菌防治土传真菌病害的重要作用机制,因此,研究木霉菌株的几丁质酶和葡聚糖酶活性与高效生防木霉菌的筛选之间的关系,对于筛选出高效生防木霉菌株有重要的指导价值。 1 材料和方法 1.1 木霉素 1.1.1 绿色木菌 T1-1,T2-1,LR,LTR-2,LTR-2K,Q1,Q2,2(2),Ag2-1,X41。 1.1.2 实行x.2.2%h3.2%h3,4,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5, T1,T4,T5,T6,T7,T8,T9,T10,T11,TC,Sxb,Y32,X1,X2,X3,X4,X5,X6,X7,X8,X9,X10,X11,X12,X13,X14,X15,X17,X18,X19,X20,X22,X23,X24,X25,X26,X28,X29,X30,X32,X33,X34,X36,X37,X38,X39,X40。 1.1.3 康福木菌 TK,TK7a,其中TK7a由澳大利亚联邦科学院水土所(CSIRO LandWater)Maarten Ryder博士提供。 1.1.4 绿色木材菌 Tg21,TL31,浙江大学楼兵干博士提供,对郁金香球茎致病。 1.2 菌落抑制率的测定 将纯化好的木霉菌与棉花立枯病菌在PDA平板上培养3d,用打孔器挖取直径为0.5cm的菌块,分别置于PDA平板同一直径的两端,相距6cm。进行对峙培养,以只接种立枯病菌块的平皿为对照,重复三次。置于培养箱中28℃培养。4d之内连续观察记录,并于对峙第72h量取菌落半径,取三次平均值,按下式计算抑制率。 抑制率=(对照立枯病菌菌落半径—与木霉菌对峙的立枯病菌菌落半径)/对照立枯病菌菌落半径×100%。 同时显微观察木霉菌与立枯病菌在菌落交叉处的相互作用情况。 1.3 透光率的测定 将不同木霉菌2×107个木霉孢子分别接种于培养基(KNO310g,KH2PO45g,MgSO4·7H20 2.5g,FeCl32mg,聚乙烯吡咯烷酮(PVP)1%,蔗糖5g,几丁质胶体5g,加水至1000mL,pH=6.0)中,28℃150 r/m振荡培养3d。培养物于8000g离心10min,所得上清用玻璃纤维滤纸过滤,用0.45μm的超滤膜过滤除菌。所得液体为样品几丁质酶液。将0.5mL样品几丁质酶液和0.5mL几丁质胶体(1%,悬浮于50mmol磷酸钾缓冲液和0.02%NaN3中,pH=6.7)混合,25℃培育24h。以100℃灭活15min的样品几丁质酶液作对照。将培育好的混合物用5mL蒸馏水稀释,在510nm测透光率,以胶状几丁质悬液透光率增加来计算酶活,重复三次,取平均值。规定透光率增加10%的酶量为1个酶活性单位(U)。 酶活性(U)=10×(处理液透光率—对照液透光率)/对照液透光率 式中:10代表由透光率增加10%酶活力单位增加1U的换算系数。 1.4 粗酶液及葡萄糖的制备 将木霉接种于培养基(0.5g葡萄糖,6.7g酵母浸出粉,4.0g茯苓粉,1g(NH4)2HPO4,0.2gKCl,0.2gMgSO4·7H2O,加水补足至1