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奈达铂联合放疗治疗小鼠lewis肺癌实体瘤c57bl小鼠的疗效观察
肺癌是危害人类健康最常见的肿瘤之一,发病率和死亡率呈上升趋势。目前多根据不同病理类型、分期采用综合治疗的方案,以提高肿瘤疗效,减少和推迟远处转移,减少治疗后并发症,其中放射增敏方案一直引人关注,并已取得了可喜疗效。增敏指某些化学物质能增强射线对肿瘤内乏氧细胞的杀灭作用,而对有氧的正常组织损伤较小。近30余年来,曾经探索过多类放射增敏剂,如亲电子的硝基咪唑类化合物、金属类化合物、卤素类化合物等,但毒副作用限制了某些药物的使用。奈达铂即顺甘醇酸二氨铂(nedaplatin),分子式为:C2H8N2O3Pt,相对分子质量为303.18,是新一代铂类抗癌药。奈达铂抗癌作用机制与顺铂相同,主要是与核苷反应生成核苷-铂结合物,以顺铂同样的途径与DNA结合,抑制DNA复制,其溶出度大约是顺铂的10倍,用药期间无需水化。该药对多种实体癌有效,毒副反应小。为探索其对Lewis肺癌的放射增敏作用和转移抑制作用,本实验将奈达铂和放射治疗联合应用治疗C57BL小鼠Lewis肺癌实体瘤,观察疗效和转移率,以便为临床应用提供参考意见。
材料和方法
1 材料表面
1.1 实验动物
清洁级C57BL小鼠,6~8周龄,体重18~22 g,雄性,购自南京大学模式动物研究所。
1.2 肿瘤植株
Lewis肺癌细胞株,由上海胸科医院胸部肿瘤研究所沙老师提供。
1.3 新鲜溶液的配制
奈达铂:10 mg/瓶,由山东齐鲁医药有限公司提供。用时以生理氯化钠溶液溶解,制成浓度1 mg·mL-1的新鲜溶液。小牛血清:上海元象医疗器械公司产品。RPMI1640培养液:上海元象医疗器械公司产品。
1.4 实验设备
实验仪器γ-射线,由我院放疗科提供,以Co60为照射源,照射剂量率0.9 Gy·min-1。
2 方法
2.1 瘤细胞悬液的制备
① 引瘤鼠接种:将Lewis肺癌细胞株置于1640完全培养液中传代1周,制成1 mL含107个细胞的悬液。用7号针于每只鼠左前肢皮下注入0.3 mL瘤细胞悬液。② 荷瘤鼠模型建立:引瘤鼠肿瘤长至直径约2 cm后,处死引瘤鼠立即放于75%的酒精中消毒,2 min后取出,手术分离瘤体,用生理氯化钠溶液、庆大霉素消毒冲洗,玻璃匀浆器匀浆后以1∶3比例加入生理氯化钠溶液制成瘤细胞悬液。每只鼠左前肢皮下注射0.3 mL细胞悬液,待15~20 d后小鼠左前肢肿瘤生长至1.0~1.5 cm3,随机分组。
2.2 左下肢肿瘤局部注射
① 对照组(n=5×2组):腹腔注射生理氯化钠溶液0.1 mL。② 单纯放疗组(n=5×2组):每只小鼠左前肢肿瘤局部以15Gy射线照射。③ 奈达铂组:分为2个亚组,一组(n=5)腹腔注射奈达铂5 mg·kg-1鼠重;另一组(n=5)腹腔注射奈达铂10 mg·kg-1鼠重。④ 联合放疗组(n=5×2组):腹腔注射奈达铂5 mg·kg鼠重,4 h后每只小鼠左前肢肿瘤局部以15Gy射线照射。
2.3 辐射法
每次4 只小鼠,清醒状态下照射。照射时将小鼠固定,非照射部位用铅板遮蔽。
2.4 病理组织学检测
分组后,观察荷瘤鼠一般情况,如进食、活动;每隔4 d测量肿瘤最长径a值和最短径b值,根据公式v=1/2ab2换算出肿瘤体积;计数60 d荷瘤鼠存活数。
分组处理后d 20处死各组小鼠5只,手术分离肿瘤并称重。计算抑瘤率、预期值/观察值(E/O)、肿瘤生长延缓时间、增敏系数(enhancement effector,EF)。① 肿瘤抑制率=(对照组平均瘤重-实验组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%。② 预期值/观察值(E/O)=T2×T3/(T1×T4),E/O1.4提示有放射增敏效应(T1:对照组平均瘤重,T2:奈达铂组平均瘤重,T3:单纯放疗组平均瘤重,T4:联合放疗组平均瘤重)。③ 肿瘤生长延缓时间:绝对肿瘤生长延缓时间AGD(absolute growth delay)=TR-TC,规格化肿瘤生长延缓时间NGD(normalized growth delay)=TL-TG,TR为单纯放疗组小鼠瘤体积从1.1~2.5 cm3的天数,TC为对照组小鼠瘤体积从1.1~2.5 cm3的天数,TL为联合放疗组小鼠瘤体积从1.1~2.5 cm3的天数,TG为奈达铂组小鼠瘤体积从1.1~2.5 cm3的天数。④ EF=N GD/A GD,EF1提示有放射增敏效应。
取肿瘤及肺组织做病理学检查。将小鼠肺取出用福尔马林固定2 h后,经HE染色后显微镜下计数肺叶转移结节,计算肺转移率。
2.5 统计方法
各组资料均采用双侧t检验或相关分析方法,P0.05为差异有显著性,P0.01为差异有非常显著性。
结果
1 治疗前患者皮肤损伤
分组治疗后随时间的推移,对照组小鼠进食、活动明
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