基于lc-ms法的酒黄精炮制前后化学成分分析.docxVIP

基于lc-ms法的酒黄精炮制前后化学成分分析 黄精是百合科黄精属植物的云南黄精。etherlmsp.sibium红色或多花黄精p.cyrtonemahua干燥的生根。具有补气养阴、健脾、润肺、益肾的功效。主要含有多糖、皂苷、氨基酸等活性成分,有关黄精炮制后化学成分的变化,已有一些研究报道,如其中的多糖和薯蓣皂苷类的量降低。 前期在对黄精炮制前后二氯甲烷提取液HPLC图谱对比分析中发现,黄精炮制后明显增加2个色谱峰,且峰面积随炮制时间变化而变化。本实验对这2个新产生的化合物进行分离纯化,LC-MS分析确定为5-羟甲基麦芽酚(DDMP)和5-羟甲基糠醛(5-HMF),进一步采用HPLC法对同一品种黄精中2种成分的量随炮制时间的变化、不同品种黄精炮制前后是否有相同变化、以及市售15个批次酒黄精中这2种成分的量的范围进行了研究,为酒黄精饮片质量标准的制定及阐明黄精炮制前后物质基础的变化提供科学依据。 1 仪器、试药与仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪:G1322A脱气机,G1311A四元泵,G1313A自动进样器,G1316A恒温箱,G1315B DAD检测器,HP化学工作站;Agilent1200 SL型高分离度快速液相色谱仪:G1322A在线脱气机,G1312B SL型二元泵,G1316B SL型恒温箱,G1315CDAD SL型检测器,G1367C SL型自动进样器,HP化学工作站,Agilent 6320型离子阱质谱仪;Agilent 1200制备液相色谱仪:G1361A四元泵,G2260A自动进样器,G1315D检测器,HP化学工作站;FW—80微型高速万能试样粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司),TCQ—250超声波清洗器(北京医疗设备二厂),CP225D电子天平(德国Sartorius集团),超纯水系列(美国Thermo Scientific Nanopure),FD—1D—50冷冻干燥机(北京博医康实验仪器有限公司)。 绍兴黄酒(瓜渚湖黄酒,绍兴县第三酒厂,2010-11-20生产),甲醇及二氯甲烷(分析级,国药集团化学试剂有限公司),水为超纯水,甲醇(色谱级,国药集团化学试剂有限公司),5-羟甲基麦芽酚(2,3-二氢-3,5-二羟基-6-甲基-4-氢-吡喃-4-酮,DDMP)为课题组从制何首乌中制备得到,质量分数95%以上,5-羟甲基糠醛(5-HMF,批号111626-200402)对照品购于中国食品药品检定研究院。 黄精购于贵州省黔西南布依族苗族自治州兴仁县,经北京中医药大学中药学院刘春生教授鉴定,分别为百合科黄精属植物滇黄精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.、黄精Polygonatum sibiricum Red.和多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的根茎。各品种酒黄精为依照《中国药典》2010年版方法自制,多花黄精分别炮制4、8、16、24、32 h,得到不同时间的酒黄精,滇黄精与黄精炮制16 h得到各自酒黄精。市售黄精饮片均为酒黄精,各黄精药材及其饮片来源见表1。 2 方法和结果 2.1 坚持坚持“受教育引导下结”， 黄精:除去杂质,洗净,略润,切厚片(2~4mm),干燥,即得。 酒黄精:取净黄精,加黄酒(每100 kg黄精,用黄酒20 kg),拌匀,闷润过夜至酒吸尽,置适宜容器内,隔水加热,分别炖至不同时间取出,干燥,即得。 2.2 sdmp和5mf的分离和结构试验 2.2.1 高效液相色谱法 取酒黄精粉末50 g,加10倍量二氯甲烷超声提取3次,每次40 min,滤过,合并滤液,减压收干,残渣加甲醇10 m L使溶解,0.45μm滤膜滤过,吸取100μL续滤液,注入制备液相色谱仪。色谱条件:色谱柱为Zorbax SB-C18Prep HT柱(250 mm×21.2 mm,7μm),流动相为甲醇-水(10∶90),体积流量10 m L/min,检测波长280 nm,柱温35℃,进样量100μL。重复进样,接收并合并相应2个色谱峰(色谱峰1和2)流分,适当低温减压浓缩后,冷冻干燥,得到色谱峰1和2对应的成分。 2.2.2 检测条件和扫描方式 LC-MS色谱条件:色谱柱为Zorbax SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液(6∶94),体积流量0.6 m L/min,检测波长280 nm,柱温35℃,进样量5μL。离子源为电喷雾离子源(ESI);正离子检测模式;毛细管口电压4 000 V,温度350℃;扫描方式:全扫描和子离子全扫描;扫描范围m/z:20~700;干燥气(氮气)体积流量9 L/min;柱后分流,分流比3∶1。 色谱峰1和2与DDMP和5-HMF保留时间、紫外图谱以及裂解规律一致