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黄芩有效成分高效液相色谱图谱的初步研究 中药黄鼠尾是嘴唇科植物的干燥根，具有清热除湿、清火解毒、冷血安神等功效。而其清热作用更是使黄芩成为临床常用的解热药物。 中国药典中,黄芩苷作为黄芩的主要有效成分用于含量测定以判定药材的优劣。然而,作为道地药材的热河黄芩,与其他产地黄芩相比,黄芩苷含量偏低。除黄芩苷外还有哪些成分对黄芩的作用起到了重要的作用是本研究的工作目的。由于黄芩中化学成分较多,本课题选择灰色关联法,对黄芩的解热作用与化学成分进行多元分析。 1 材料表面 1.1 阴山ph、阴山子片、阿肠溶片 一年生河北承德(批,辽宁大连(批,山西朔州(批3个产地的黄芩。阿司匹林肠溶片,规格40 mg,北京曙光药业责任有限公司,批号:国准干酵母,配制酵母悬液——称取干酵母20 g置于乳钵中,逐渐加入蒸馏水磨为均匀的悬液,最后定容为100 mL(浓度为20%),此液须于临用前配制。 1.2 仪器、检测方法 电子分析天平:塞多利斯分析天平,BS1248,(上海精密仪器仪表有限公司)。迈克大夫电子体温计:MT1931(北京天天联众科技有限公司)。低温高速离心机:H2500R-2(湘仪离心机仪器有限公司)。GC-911-γ-放射免疫技术器(中国科技大学实业总公司)。Agilent 1100高效液相色谱仪(四元泵、在线脱气、VWD检测器)。 1.3 试剂及标准体系 PBS:北京欣源佳和生物科技有限公司,批号070830。人白介素1β(IL-1β)放免试剂盒:北京华英生物技术研究所,批环磷酸腺苷(CAMP)放免试剂盒:北京华英生物技术研究所,批精氨酸升压素(AVP)放免试剂盒:北京华英生物技术研究所乙腈为色谱纯(MERCK);纯净水、磷酸,分析纯。 1.4 基础直直直通道温度 Wistar大鼠,雄性,SPF/VAF级,体重190~210 g,基础直肠温度37.0~38.5 ℃。北京维通利华实验动物技术有限公司,许可证编号:SCXK(京)2007-0001。 2 方法和结果 2.1 解热药效应 2.1.1 样品制备 山西醇提物,山西水提物,河北醇提物,河北水提物,大连醇提物,大连水提物(由北京中医药大学中药学院中药化学系提供)。 2.1.2 平均体温变化 平均体温变化曲线:将所有大鼠置于实验室环境适应3~4 d,每日用体温计从肛内测体温2~3次,间隔1 h,使其适应测肛温操作,减少实验过程中体温波动对结果的影响。实验当日每小时测体温1次,连续2~3次,选取体温在37.0~38.5 ℃之间,体温变化不超过0.3 ℃的动物供实验用。并取平均值为基础体温。将合格大鼠随机分为9组,每组10只,分别为各地黄芩水提物组(3组)、各地黄芩醇提物组(3组),正常对照组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、阿司匹林阳性对照组。灌胃1 h后,各组背部皮下注射20%的酵母混悬液(正常对照组注射无菌生理盐水)。然后于造模后0.5、1、2、4、6、8、10、12 h各测大鼠体温1次,观察体温变化情况。以体温上升高度(Δt)为纵坐标,测量时间为横坐标,根据各测量点的均数绘制平均体温变化曲线。结果见表1。 结果表明,第8小时的测量值效果最显著。在灰色关联处理数据过程中,需要对照热效果体温变化原始数据进行无量纲化处理,因此本次研究采取了与模型组比较,从而得到8 h的比较药效值。公式如下: (第8小时的体温变化值-第8小时模型组体温变化值)/第8小时模型组体温变化值×100%。 结果见表2。 结果表明河北醇提物的解热效果与其他提取物相比,效果较好。 2.2 高效液体层析成像的测定 2.2.1 酸相和检气系统 色谱柱:Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,10 nm,5 μm)。 流动相:A为0.6%磷酸水溶液;B为乙腈。梯度洗脱:0 min:80% A,20%B;45 min:73%A,27%B;70 min:50% A,50% B;80 min:20% A,80% B。检测波长:274 nm;流速:1.0 mL/min,进样量10 μL,柱温30 ℃。 2.2.2 hplc-ms分析 2.1项下3个产地6种黄芩提取物1 mL于10 mL容量瓶中,加70%甲醇至刻度,称重。超声30 min,再称重并补足质量。用0.45 μm微孔滤膜过滤,取续滤液1 mL作为供试品溶液备用。 按3.1项下色谱条件测定,得HPLC图谱。结果见表3。 2.2.3 吾素保留时间 按3.1的色谱条件下,将黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素的标准品分别进样,可知保留时间为31.352 min的是黄芩苷,49.74 min为汉黄芩苷,60.815 min为黄芩