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水稻花器官突变体遗传分析 在植物生长发育的过程中，花无疑是最佳的产物之一。大约有250万种植物需要开花，其中占主导地位的植物也被称为开花植物。被子植物的花作为重要繁殖器官一直是研究的重点,虽然不同物种的花器官有明显的不同,但它们的基本结构是相似的,有不同程度的同源性。 植物花器官发育的分子调控机制研究比较多,根据双子叶植物拟南芥和金鱼草的研究基础归纳出ABC模型。此模型预测:花器官可划分为四轮,ABC类基因分别以A、A+B、B+C、C的模式控制四轮花器官萼片、花瓣、雄蕊、心皮的发育。在拟南芥上,A类基因包括AP1和AP2,B类基因包括AP3和PI,C类基因包括AG,除AP2外都属于MADS-box基因。随后的研究将ABC模型发展成ABCDE模型,成为一个被人们公认的阐释花器官发育分子机制的主要模型。 近年来,花器官调控机制的研究在单子叶模式植物水稻上也取得了很大的进展。水稻花器官由颖壳、浆片、雄蕊、雌蕊组成。浆片、雄蕊、雌蕊被认为是水稻的二、三、四轮花器官,但是颖壳是否为第一轮花器官以及内外颖是否为同一轮器官的问题还没有定论。在水稻中,B类基因OsMADS2、OsMADS4和OsMADS16(spw1),C类基因OsMADS3、OsMADS58以及D类基因OsMADS13研究得较为深入,另外有5个E类基因得到克隆,其中OsMADS1的研究较多,多个等位突变基因被克隆,其表型具有E类基因的功能。另外一个重要基因DROOPING LEAF(DL),属于MADS-box基因家族,调控花分生组织的决定性和抑制B功能基因的表达[11,12,13,14,15,16,17,18]。相对拟南芥,水稻花发育模式的研究还不够完善,更多突变体的出现将为研究提供很好的材料。 笔者在育种过程中发现的一个突变体,除了花器官,其它农艺性状与野生型无异,进一步分析其突变表型和遗传特性,将为该基因的定位克隆及功能研究奠定基础。本文对此开展了相关研究。 1 材料和方法 1.1 材料的突变 水稻浆片叶化突变体lfl由是泸恢1089中突变而来,已自交5代,表现稳定遗传。 1.2 遗传分析群体 以突变体为父本,D62A、岗46A、II-32A和金23A分别为母本杂交,获得F2代,4个组合作为遗传分析群体。在抽穗期观察每个单株的花器官表型情况,并根据其在群体中的分离情况分析该群体的遗传特性。 2 结果与分析 2.1 花器官突变表型 野生型的水稻正常颖花包括1个外颖和1个内颖,1对浆片,6枚雄蕊,6个连接雄蕊的花丝和一枚雌蕊,雌蕊着生两个柱头。内外颖通过相互嵌合的钩合槽把花内器官封闭起来,2个浆片位于颖花基部外颖一侧(图1A,B)。 lfl突变体有多种花器官突变表型:其中部分表现为内颖缺失(图1C,E),在内颖一侧有2个叶状体被外颖包裹于内,其基部与浆片连在一起(图1F,G,Q),雄蕊正常,雌蕊基本正常,极少数的出现三柱头。 在有内颖的突变体颖花中,外颖正常;内颖普遍都呈弯曲,极少数边缘叶化(图1D,E,P);内外颖轴两侧各有1个叶化浆片、有极少数突变体浆片和内颖边缘连在一起(图1H,J,L,O);雄蕊发育有多种异常:增多或退化(图1J,M,N)、部分为多雄蕊嵌合体(图1R)、或雄浆嵌合体(图1S)、少数突变体的雄蕊缺失;雌蕊发育基本正常,少量为三柱头(图1N)、另外一些突变体在内颖一侧又着生一个新子房(图1H,I,J,K)。 2.2 突变性状调查 用突变体作父本,D62A、岗46A 、II-32A 和金23A作母本配制杂交组合,各组合F1代所有的单株性状均表现正常,表明突变性状是受隐性基因控制。各组合F2代群体单株性状调查结果表明:正常株与突变株的比例符合一对基因控制的3∶1分离比例,且F2群体的突变植株都表现花器官表型异常。进一步表明该突变性状是受一对隐性基因控制。 3 lfl的突变表型及基因表达 lfl突变体外颖正常,内颖有正常,异常的情况属于两个极端:缺失或伸长弯曲;浆片叶片化,极少数颖壳化;雄蕊正常,部分增多或退化,部分为雄浆嵌合体;雌蕊多数正常,部分增多或多柱头。 几个花发育相关的重要基因,OsMADS1、OsMADS2、OsMADS4、OsMADS3、OsMADS58、OsNADS13、DL等都研究得比较深入,除了一些突变体的部分表型外,如osmads2的浆片颖壳化,它们的突变表型与lfl都有不同程度的差别。水稻上其它一些突变体也有部分表型与lfl的表型相似,比如定位于第二染色体的DH1基因,其编码LOB结构蛋白,起到调控水稻颖壳形成的作用,dh1的颖壳会退化为膜状或丝状器官,这些异常器官与叶化的浆片外形上相似;定位于第三染色体的pal的表型,与lfl的无内颖突变表型相似,Luo认为两个叶状体是由内颖的转化而来的,pal的外颖、浆片、雄蕊、雌蕊的发育正常;