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阜油1号薄荷茎尖离体培养技术研究 采用茎尖离体培养技术，对阜油1号的生态效益进行了示范，原油产量超过30%，油品质也显著提高。1998年笔者对影响组培苗生长和生产成本的几项培养基成分和培养方法进行了试验研究, 总结出了繁殖速度快、培养基简化、成本低廉的实用技术, 现报告如下。 1 材料和方法 1.1 培养条件及光照 试验取材:“阜油1号”薄荷茎尖试管苗。 培养条件:温度为27±1℃;光强为3 000~4 000lx;每天14h连续光照;培养容器为125ml广口瓶。 1.2 测试方法 1.2.1 薄荷苗的制备 设置4个处理的培养基浓度:1/2MS、2/3MS、3/4MS和全量MS。采用固体培养基, 琼脂7g/L、蔗糖30g/L、pH5.8。薄荷试管苗按每段2个叶节截取, 垂直插于培养基中, 每瓶5段。调查记载各处理的发根时间、繁殖系数、根茎叶的生长状况等。 1.2.2 叶节和茎段的垂直分布 采用固体2/3MS培养基, 将试管苗分别截成含1个叶节、2个叶节和3个叶节的茎段。1个叶节的茎段垂直置于培养基中, 深度以叶节接触培养基为宜。2个叶节和3个叶节的茎段分垂直和水平2种放置方式。每瓶5个茎段, 观察记载生长状况。 1.2.3 比较甘蔗和普通糖的过程 2/3MS固体培养基中, 分别加入30g/L蔗糖和普通食用白糖30g/L, 培养基其他成分相同, 观察对比生长状况。 1.2.4 控制培养基的制备 采用2/3MS培养基, 固体培养加入琼脂7g/L;液体浅层培养不加琼脂, 培养基不需熬煮, 定容调酸后立即分装, 每瓶10ml培养基 (固体为25ml) 。灭菌等其他操作相同, 培养物均为2个叶节的茎段, 水平放置。 2 结果与分析 2.1 生长状况的分析 试验结果表明, 在各种浓度的培养基中, 培养物均能发根生长。随着浓度的增加, 发根速度和繁殖系数均略有下降, 但随着营养物的增加, 茎叶生长状况逐渐改善。培养物在1/2MS培养基中发根快, 腋芽25d左右可长成高8cm左右、具有8~10个叶节的组培苗, 但苗势弱, 30d后中下部叶片开始变黄。在MS培养基中, 培养物发根、腋芽伸长较1/2MS培养基中的晚2~3d, 每瓶茎数少2个左右, 但茎叶生长明显健壮, 节间短粗;30d左右可长成高8cm左右、具有9个以上叶节的组培苗;50d仍无黄叶。2/3MS、3/4MS培养基中, 培养物的生长状况介于1/2MS和MS之间 (见表1) 。从生产成本和扩繁要求两方面考虑, 薄荷组培苗微繁采用2/3MS培养基最为适宜。 2.2 双叶节和3叶节茎段的生长 单叶节茎段的生长发育较双叶节、3叶节的晚3~5d, 但几乎每个叶节的2个腋芽均能伸长、成苗, 繁殖系数反较双叶节的高。3叶节茎段的腋芽前期生长较快, 25d后由于伸长的腋芽较多, 光照、营养条件差, 下部叶片开始变黄 (见表2) 。双叶节和3叶节的茎段水平放置于培养基中, 每个叶节既能发根又能长芽, 同等条件下与垂直放置的相比, 每瓶多长出3~4个茎, 繁殖系数明显提高。因此, 一般情况下, 薄荷组培苗的微繁采用双叶节茎段水平放置较为适宜。 2.3 组培苗的生长 试验结果表明, 同等条件下, 蔗糖和普通食用白糖对组培苗生长的影响, 30d内无明显差异;35d后, 采用普通食用白糖的组培苗, 下部叶片较采用蔗糖的先变黄。因此, 在薄荷组培苗的微繁中, 完全可用普通食用白糖替代蔗糖。 2.4 增加数增加23条 试验显示, 液体浅层培养较固体培养茎段发根提早1d左右, 每段的根数增加2~3条;初期苗生长速度不及固体培养的生长速度, 12d后生长速度明显加快, 25d左右生长量赶上固体培养的生长量;而后由于液体培养基养分消耗殆尽, 生长速度趋缓, 下部叶片开始变黄 (见表3) 。 3 组培苗的繁殖、培养 (1) 薄荷组培苗微繁的培养基浓度、茎段大小应根据具体情况而定。一般情况下, 采用2/3MS培养基、双叶节茎段水平放置较为适宜;保苗阶段, 试管苗需保存较长时间, 应采用MS培养基;若材料较少, 需迅速扩繁, 则采用1/2~2/3MS培养基、单叶节繁殖较好。 (2) 液体浅层培养中, 培养基的液面不宜太深, 以常规固体培养基的1/2~1/3为宜。过深, 培养物完全沉入瓶底, 易窒息而死, 成苗率低。同时, 组培苗要及时继代培养, 以免因营养耗尽而枯死。 (3) 组织培养所需药品的价格较高, 琼脂价格昂贵, 蔗糖价格也不断上扬, 因此, 降低成本成为组培苗工厂化生产的重要环节。在不影响培养物生长繁殖的基础上, 用普通食用白糖替代蔗糖, 不加琼脂, 适当降低培养基的成分可使组培苗的生产成本大幅度下降, 同时提高了工作效率, 在生产实践上具有较高的应用价值。