海人酸杏仁核微量注射法致大鼠癫痫性癫痫的实验研究.docxVIP

海人酸杏仁核微量注射法致大鼠癫痫性癫痫的实验研究 由于癫痫发作没有预见性，癫痫发作程度不能由人类控制。此外，癫痫患者缺乏深入研究的能力和直接研究。目前，癫痫的发病机制、癫痫的治疗策略以及抗癫痫药物的选择仍主要依靠动物模型。癫痫动物模型近年来发展很快,其分类方法较多,但在临床实践中,癫痫的发作类型是决定其药物反应和预后的关键因素之一。依据癫痫发作类型可将动物模型分为部分性发作和全面性发作模型。本实验成功建立了大鼠杏仁核海人酸(kainic acid ,KA)微量注射化学点然模型,适用于对复杂部分性发作和全面性发作的研究,现报道如下。 1 材料和方法 1.1 %水合氯醛、多聚甲醛 料 雄性Wistar大鼠95只,体重约250 g,月龄约2.5月,购于本校实验动物部。KA购于美国Sigma公司。10%水合氯醛由吉林大学第一医院制剂室提供。多聚甲醛购于北京化学式剂公司。仪器和设备包括KOPF957-002352R型立体定位仪(美国)、小型CE-0120型牙科钻(韩国)、EEG-7209型脑电记录仪(日本)和Ag-AgC1乏极化电极(日本)。 1.2 分组时间的确定 正常对照组15只,假手术组和KA致痫组各36只,分别按6、24、72 h和7、14、21 d时间点分为6组,每组6只。在正常对照组、假手术组和KA致痫各组中随机选取2只致痫后连续记录6 h脑电变化。 1.3 皮肤原位内注射pa 左侧顶叶皮层电极植入位置坐标为前囟后4.0 mm,左外侧3.0 mm,深度颅骨表面下1.5 mm,电极与脑电仪相连,KA致痫后连续记录6 h脑电变化。以右侧杏仁基底核为KA注射部位,坐标位置为前囟3.5 mm,旁开4.5 mm,颅骨表面下8.0 mm。应用立体定位仪,按上述位置垂直插入电极。用高效粘合剂、牙托粉加502胶固定电极。麻醉后30 min用5 μL微量注射器注入KA 1 μL,假手术组注入等量PBS液,速度均为1 μL·min-1,留针5 min,缓慢退针,以确保药物被完全吸收。注射完毕后结扎皮肤切口,将大鼠置于50 cm×30 cm×50 cm敞口玻璃罩中便于行为学观察。术后腹腔注射青霉素(80万U·kg-1·d-1),共5 d,以预防感染。 1.4 灵敏度:2s-1,灵敏度 脑电记录仪参数:走纸速度1.5 cm·s-1,灵敏度50 μV·mm-1。无关电极置于大鼠鼻尖,使脑电仪和动物均接地,KA注射后连续记录6 h。 1.5 大鼠行为分类 按Racine分级法,将大鼠行为分为0~Ⅴ级,Ⅰ~Ⅲ级属于癫痫部分性发作,Ⅳ和Ⅴ级属于癫痫性大发作。 1.6 动物脑梗死超早期溶血反应 将大鼠麻醉后开腹暴露心脏,0.9%生理盐水约200 mL和4%多聚甲醛250 mL先后快速灌流固定动物,断头取脑,冠状切片(每片厚约2~3 mm),4%多聚甲醛固定1.5 h,常规梯度酒精脱水,石蜡包埋,切片(片厚4 μm),HE染色,光镜观察。 2 结果 2.1 动物动物癫痫性发作 实验大鼠在KA杏仁核注射后平均41.2和61.2 min分别依次出现部分性发作和癫痫性大发作,均出现Racine Ⅳ级以上发作。表现为凝视、湿狗样颤动、点头等部分发作,前肢痉挛、后退、旋转、站立倾倒、四肢抽搐等大发作行为,部分动物出现癫痫持续状态和自发性抽搐。假手术组有2只出现抽搐,均表现为部分发作行为,无肢体抽动及大发作现象。 2.2 术后感染情况 所有实验动物95只,麻醉死亡3只。杏仁核KA注射大鼠抽搐死亡3只(其中有2只体重下降,1只出现血尿,1只出现呼吸抑制),术后感染死亡1只,点燃成功率为90%。假手术组杏仁核注射PBS液后无抽搐致死者,感染死亡1只,参与实验大鼠87只。 2.3 癫痫性放电实验 正常大鼠脑电波形,频率以5~10 Hz为主,波幅小于500 μV。假手术组有3只出现散发的尖波。KA注射后大鼠脑电均出现多种形式的癫痫性放电。典型波型有单棘波、多相棘波、双相棘波、棘慢波、尖波发作性节律及发作后抑制等。 2.4 产海马神经元的变化 正常大鼠海马各区和颞叶皮层神经细胞排列整齐,结构完整,形态正常,见图1(封二)。假手术组海马各区和颞叶神经元丢失不明显,可见胶质细胞轻度增生,无明显血管增生表现。KA注射早期主要表现为鼠海马各区和颞叶神经元核周体皱缩,树突肿胀,胶质细胞水肿,以海马为著。KA给药后24 h~7 d海马神经元丢失明显,有胶质斑痕形成、血管增生现象,颞叶也有相应改变,见图2(封二)。KA注射后7~21 d可见海马各区和颞叶胶质细胞在受损神经元周围积聚形成卫星灶,并见神经元吞噬现象,以海马CA3区最为显著,见图3(封二)。 3 基于模型的癫痫模型 引起癫痫发病的遗传和获得性因素十分复杂,目前尚没有一种动物模型能模拟所有的癫痫发作类型。依据发作类型,通常将癫痫动物模