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? ? RNA药物非病毒递送系统研究进展 ? ? 陈欢，魏利军 （哈药集团股份有限公司产品立项部 北京 100023） DNA双螺旋结构以及中心法则被发现后，人类就设想着通过对遗传信息的干预来治疗疾病。随着遗传学的不断发展，尤其是人类基因组测序工作完成后，疾病与基因之间的关系逐渐清晰，将遗传物质作为治疗靶点已成为现实[1]。目前已上市核酸治疗产品包括针对DNA的药物或疗法（含体外改变基因的细胞疗法）、针对RNA的药物以及核酸适配体。核酸药物中与DNA有关的药物分类众多，涉及的技术领域庞杂。基于DNA的疗法需要对遗传物质产生永久性变化，存在将外源性基因整合入患者基因组的风险；另外，其需要进入细胞核才能发挥作用，提高了应用难度。相对而言，RNA类药物易于生产和递送、具有较高的安全性，20余年来已取得了引人瞩目的成果。本文主要针对RNA，包括反义寡核苷酸（ASO）、小干扰RNA（siRNA）、信使RNA（mRNA）以及微小RNA（miRNA）[2]的药物递送系统研究进展进行综述。核酸适配体和CpG寡聚核苷酸通过特定结构特征而非本身序列特征进行识别，不纳入本综述范围。 自福米韦生于1998年上市以来，迄今共有15款针对RNA的药物上市。近年来，随着技术日趋成熟，此类药物的发展明显有加速趋势。2015年前仅有3款药物上市，而2018年至今不足4年时间，已先后有12款药物上市。 RNA药物的发展不限于技术的进步，其市场表现也相当亮眼。2016年上市的用于治疗脊髓性肌萎缩的药物诺西那生钠（商品名：Spinraza）的年销售额自2018年起已连续4年超过10亿美元，成为本领域首个“重磅炸弹”级药物。2020年，新冠病毒导致的全球疫情促使辉瑞/BioNTech合作开发的疫苗BNT162b2（商品名：Comirnaty）和Moderna开发的疫苗mRNA-1273（商品名：Spikevax）于当年12月相继获得FDA紧急使用授权，用于预防新冠病毒感染。财报显示，Comirnaty和Spikevax在2021年全球总销售额分别高达368亿美元[3]和177亿美元[4]。 根据沃森-克里克碱基配对规则，核酸药物只需针对目标基因适当地重新排列核酸的碱基序列，就有望开发成具有生物特异性的药物，避免了研发过程中的盲目性。在确定靶标序列后，优化设计核酸药物的序列筛选耗时也远低于小分子化合物和抗体的筛选。相较于抗体药物，核酸药物不仅候选靶点更丰富，100个碱基以下的核酸药物通常可以进行化学合成，更容易保证批次间稳定性和进行质量控制。核酸药物的独特优势使其有望成为继小分子和抗体之后的第三大类型药物。 然而，核酸要进入体内发挥作用却要面对多重障碍：首先，核酸药物易被血浆和组织中RNase酶降解，并易被肾脏快速清除；其次，核酸具有天然的免疫原性，进入体内后易引起免疫反应；另外，核酸药物的相对分子质量和负电荷让其不能自由通过细胞膜；最后，核酸药物进入细胞后易被“卡”在内吞小体中无法发挥功能。所以，自核酸药物诞生以来，其开发过程中的主要问题一直是如何有效地对其进行递送[5]。 解决核酸药物的递送有2种思路，一种是对核酸结构进行改造，使其性质稳定并躲避免疫系统的识别；另一种是利用药物递送系统。 不同于小分子化合物其药理学和药动学性质均由分子结构决定，核酸药物的药理学性质更多地由核酸序列决定，而药动学性质更多地由化学修饰的骨架和配体决定。这使得可以在不改变核苷酸序列的前提下，对核酸药物进行化学改造，从而对其药动学性质单独进行优化[6]。目前已有多种成功的修饰方案，如磷酸连接基团中的一个氧换成硫和糖环2位修饰等。改造核酸分子需要从多方面进行考虑，主要包括分子稳定性、药动学性质、碱基配位亲和力，以及避开免疫系统等。因为ASO、siRNA和mRNA等药物都需要在各种酶[如核糖核酸酶（RNase）、Argonaute 2蛋白（Ago 2）和RNA聚合酶]的作用下才能发挥作用，还必须确保修饰后能够被相关的功能酶所识别[7]。 化学修饰可以在一定程度上提高核酸药物的化学稳定性、降低免疫原性，但并不能完全解决其跨膜问题，多种针对核酸药物的递送系统应运而生。递送系统可以分为病毒载体和非病毒载体两类，病毒载体一般使用基因修饰的病毒，如慢病毒、腺病毒、腺相关病毒等，其递送效率高并可以产生持续性的治疗效果，而且可以将核酸药物递送至细胞核，这对于以DNA为靶点的药物至关重要。病毒载体的主要劣势在于其可能将病毒的基因组插入患者染色体，安全性存在争议。另外，免疫原性、较小的包装容量、高生产难度均在一定程度上限制了其使用[8]，目前大部分获批上市的核酸治疗药物均采用非病毒载体。其中，使用度较高的有脂质纳米颗粒递送系统、生物偶联递送系统以及外泌体（exosome）载体几类。 1 脂质纳米颗粒递送系