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妥舒沙星盐酸盐的合成 托司必林是日本福山化工公司在20世纪90年代开发和推出的抗菌药物。他被用来调节苯磺酸钠的水合物。本品对革兰氏阴性、阳性细菌及厌氧菌均有很好的抗菌作用,可用于治疗由细菌引起的各系统感染。本品水溶性很小,只能做成口服剂型,因此,欲使本品得到进一步推广应用,尤其是在对付严重感染时发挥更大作用,关键是改善其水溶性。文献报道,妥舒沙星7-位侧链的氨基上连接氨基酰基或二肽的前药盐酸盐的水溶性均远远大于母药,但其中报道的有关前药的水溶性、体内抗菌活性和药代动力学性质之间存在自相矛盾,如亮氨酸对应的妥舒沙星前药盐酸盐的水溶性(35mg/ml)远大于母药(0.65mg/ml),而小鼠口服给药时前者的Cmax(2.4μg/ml)和AUC[15.8(μg·h)/ml]是后者[Cmax0.67μg/ml,AUC 5.3(μg·h)/ml]的3倍左右,但前者对铜绿假单孢菌A5007的体内活性仅是后者的1/2(两者的ED50分别为12.5和6.2mg/kg),对金葡菌NCTC10649的体内活性约是后者的2/3(两者的ED50分别为2.4和1.5mg/kg)。为准确了解这些前药的体内抗菌作用,为开发研究提供候补目标物,我们选择性地合成了亮氨酸和缬氨酸对应的妥舒沙星前药盐酸盐(图1)并测定和比较了它们的体内抗菌活性。 文献报道,对甲苯磺酸妥舒沙星(TSFX·TosOH)在有机碱存在下先与N-苄氧羰基氨基酸(N-羟基琥珀酰亚胺)酯缩合,再于乙酸中氢解去苄氧羰基,最后经中和及与盐酸成盐,即得相应的妥舒沙星前药盐酸盐。重复文献操作,所得目标物的含量约95%,且不易精制纯化。随后我们改为将盐酸妥舒沙星(2)悬浮于二氯甲烷中,在N-甲基吗啉存在下以二环己基碳二亚胺(DCC)为脱水剂,与N-叔丁氧羰基氨基酸(Boc-AA)缩合,接着在1mol/L HCl和乙醇的混合溶液(体积比1∶1.5)中于85℃反应0.5h, 减压蒸干溶媒,重结晶即得目标物(总收率51.9%,含量99.5%)。 测定了二种目标物(1a,b)口服给药对小鼠腹腔感染肺炎链球菌9798和金葡球菌15的体内保护疗效,并与TSFX·TosOH作对照。结果表明,1b对2株菌感染小鼠的体内疗效弱于对照药,而1a则强于对照药。在此基础上,又进一步测定了不同给药途径时1a对小鼠腹腔感染金葡球菌01193的体内保护疗效,并与TSFX·TosOH作对照。结果表明,1a的不同给药途径对该菌的体内疗效均强于对照药(表1)。1a具有潜在的开发价值,值得进一步深入评价。 上地壳a3-二氢-4-氧代-1,8-内酰胺2-基-1,3-甲基-5-吡啶3a3e的合成 熔点测定使用AUSTRIA的REICHART熔点测定仪,温度计未经校正;核磁共振氢谱使用Mercury-300核磁共振仪测定,TMS为内标;质谱用VG-ZAB-2fz质谱仪测定。化合物2和Boc-L-Leu、Boc-L-Val的制备分别参见文献。 7-[3-(N-L-亮氨酰胺基)-1-吡咯烷基]-1-(2,4-二氟苯基)-6-氟-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸盐酸盐(1a) 2(2.20g,5mmol)的二氯甲烷(100ml)悬浊液,加入N-甲基吗啉(0.65ml)、N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸(Boc-L-Leu)(1.39g,6mmol)和DCC(1.23g,6mmol),室温搅拌4h,滤去副产物二环己基脲和未反应的2,滤液中加1mol/L HCl水溶液(50ml),充分搅拌后,分去水层,有机层减压浓缩至约5ml,加乙腈(40ml),常压浓缩至约15ml,降至室温后置于冰箱中过夜,过滤,乙腈洗,干燥得浅黄色固体3a(2.49g,80.7%),不需纯化,直接用于下步反应。 3a(6.17g,10mol)的1mol/L HCl(20ml)和乙醇(30ml)的悬浊液,于85℃反应0.5h,减压蒸干,残物用甲醇-乙醚重结晶得类白色固体1a(3.56g,64.3%),mp 196～197℃(文献:mp 198℃),含量99.5%(HPLC归一化法,下同)。 以N-叔丁氧羰基-L-缬氨酸(Boc-L-Val)和2为原料,同样操作可得1b,mp 197～198℃(文献:mp 195～198℃),含量99.5%。 小鼠骨髓感染试验 试验用药均用0.9%生理食盐水配制,组间距1∶0.8,每个化合物均设5个剂量组。 将实验动物按性别、体重随机分组,每组10只小鼠,雌雄各半,对小鼠腹腔注射100%最小致死量的感染菌液感染后,分别给小鼠口服灌胃、静脉注射和皮下注射不同浓度的试验用药液,口服给药时则4h后再灌胃一次,同时设感染对照组,记录感染后7d内小鼠死亡数,按Bliss法计算半数有效剂量ED50及95%可信限。