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一种新的废用性骨质疏松山羊模型的建立 剩余骨松弛是由于机械应力减少或局部或全身骨量流失，以及骨质量下降。废用性骨质疏松患者除出现骨痛、功能障碍、无外伤或微外伤性骨折外,还可并发软组织钙化、泌尿系结石等,导致骨折不愈合或延迟愈合或再骨折,形成骨折固定、骨量减少、骨质疏松再骨折、再固定的恶性循环,延误治疗时机,给患者增加痛苦和治疗费用,不仅造成社会医疗资源的浪费,而且明显降低了康复质量,延长了康复过程。在骨病、骨折、关节损伤等发生于中青年或儿童时继发此病还可加重社会生产力损害,可使病儿残疾,影响儿童健康成长。因此,预防或治疗废用性骨质疏松具有非常重要的临床和社会实用价值。本研究通过叩击式骨应力刺激仪对废用性骨质疏松的实验造模山羊相关检测指标的影响,发现该仪器对预防废用性骨质疏松具有较好的效果。 1 材料和方法 1.1 小锤输出的设计 叩击式骨应力刺激仪(发明专利号:CN803117),包括仪器壳、联接在仪器壳一侧的水平槽式托架和装在仪器壳内的电机、小锤以及用于驱动电机的控制电路(图1);电机以轴线前后向固定在仪器壳内的上部,电机转轴上固接有一连接轮;小锤包括沿左右向设置的锤头和竖向设置的锤杆,锤杆的一端与锤头相固接,另一端固接在壳内的顶端;在锤杆的中部设有滑孔,滑孔内套有可沿滑孔上下移动的滑块,滑块固定在连接轮的偏心位置处;锤头的前端设为圆弧状,沿着锤头运动前方的仪器壳上设有锤孔,锤孔通入托架的水平槽。外形设计采用医疗不锈钢材料制成,通过控制面板可控制小锤输出应力的大小和频率,应力的大小可控制在20～350 N之间,应力的频率可控制在0.1～40 Hz之间。托架为水平槽式,长335 mm,宽105 mm,高117.5 mm,小锤应力输出方向与托架平行。 1.2 单次饲养时只暴露2个月内坐骨神经,t 4月龄山羊18只(中国人民解放军第175医院动物实验室提供,体重14～15 kg),随机分为3组:①对照组(control, C):只暴露右侧坐骨神经,但不切断;②废用组(unloading, U):切断右侧坐骨神经;③治疗组(treatment, T):切断右侧坐骨神经。术后山羊被按组分开饲养,可以自由饮水,圈内四角放置饲料,任实验动物自由进食。室温保持在25±2 ℃,12 h间隔照明,定期消毒和通风。 1.3 跨股精神经分离 以2%戊巴比妥钠(30 mg/kg体重)腹腔内注射麻醉,无菌条件下,在股骨大转子后侧5 mm处作一纵行切口,长约2 cm,依次切开皮肤、皮下组织、筋膜,在股二头肌和股四头肌之间进行钝性剥离,暴露出坐骨神经。用1%利多卡因进行局部麻醉后,切除2 cm的坐骨神经。 1.4 单次给药时专单次进行正确的夯实实验组以石膏固定 治疗组山羊先行坐骨神经切断术,待切口完全愈合后,为了便于叩击式骨应力刺激仪的操作,给予山羊右下肢伸直位管型石膏固定,石膏固定时按规范操作,避免实验动物肢体压疮(图2)。设定恒定的叩击应力100 N,叩击频率3 Hz。具体治疗方法为:每天治疗3次,每次60 min,每次间隔3 h,总共治疗4个月。 1.5 小鼠小鼠股骨保鲜 各组山羊分别于术后2个月和4个月处死,完整取出右侧胫骨,剥离附着的软组织。用浸透生理盐水的纱布将各组标本包好后分别放入标本袋中,做好标记,置于-20 ℃保存。 1.6 测试指标 1.6.1 骨密度测定方法 骨密度(BMD)在美国NORLAND公司生产的XR-46型快速双能X线骨密度测量仪上使用小动物软件进行测定。骨密度(BMD,g/cm2)是通过电脑用骨矿含量除以外表面积计算出来。扫描模式:慢速。 1.6.2 材料点弯曲实验 用薄塑料纸将胫骨标本包裹,防止试验过程中样本干燥。样本两端用自凝树脂固定,注意固定时统一包埋深度。放置固定好的样本于实验台,进行三点弯曲实验。在Bio min MTS 858万能材料实验机上,在一个5 mm/min恒定的变形率作用下施加载荷,一个压杆在胫骨的上方中点。通过试验机的力传感器和位移传感器,试验机就能将胫骨中心点的力与位移曲线在计算机上显示出来,并随后用电脑分析。 1.6.3 鞋案样品的制备 胫骨标本先以10%福尔马林固定24 h,再以10%甲酸-福尔马林同步固定与脱钙2 w,每3 d更换脱钙液,脱钙满意后切取胫骨近侧干骺端及胫骨干中段0.5 cm大的标本,蒸馏水彻底冲洗后,将标本置于70、80、90、95、100﹪乙醇中逐级脱水,氯仿透明,石蜡包埋,分别做横向及纵向切片,厚度为6 μm,HE染色及Masson三色染色,光镜下观察组织形态学改变。 1.7 统计学分析 所有实验数据均采用 SPSS 13.0 软件进行统计学分析,各组间比较用one-way ANOVA方差分析,P0.05表示有显著性差异,P0.01表示有非常显著性差异。 2 结果 2.