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p物质调控骨重建的实验研究 骨瘦长可分为前后骨瘦长可分为骨骼松弛。实验证实P物质含量减少为特点的神经信号改变是影响骨重建的重要因素, 我们在坐骨神经切断制作废用性骨质疏松动物模型的同时, 给予体外注射P物质, 观察对大鼠骨密度的影响, 从而对P物质调控骨重建的作用做进一步研究。 1 材料和方法 1.1 实验动物和饲料 10个月龄雄性SD大鼠20只, 体质量为200~300 g, 购于山西医科大学动物实验中心, 饲养于通风透光的环境下, 摄食自来水和标准大鼠饲料。饲料由山西医科大学动物中心生产并提供。 1.2 分组及给药方法 大鼠用10%水合氯醛以3 ml/100 g行腹腔麻醉后, 沿右臀部及右后腿后侧备皮后俯卧位固定于手术台。安尔碘消毒右大腿及臀部, 触到股骨大转子及坐骨结节后, 在两体表标志中间行长约2 cm纵行切口, 逐层分离, 在半腱肌、半膜肌和股二头肌之间找到坐骨神经, 在出梨状肌处切除坐骨神经1 cm, 然后缝合皮肤切口。 将动物模型分为A、B两组, A组为对照组, B组为实验组。其中对照组于术后第2天给予耳缘静脉注射生理盐水0.5 ml/d, 共7 d。实验组于术后第2天给予耳缘静脉注射P物质0.5 mmol/d, 共7 d。 1.3 dexa检测 (1) 骨密度测定:大鼠术后6、12周, 用10%水合氯醛麻醉, 用Lunar—XR型双能X线骨密度仪 (DEXA, 由山西省儿童医院提供) 进行测定。方法:先将大鼠双后腿伸展, 俯卧于检测台上, 后确定扫描区域在大鼠双后腿范围内, 扫描后选中右股骨, 得出骨密度值, 最后进行计算机分析。扫描宽度:12 cm;扫描速度:150 mm/s。 (2) 碱性磷酸酶测定:分别术后4、8周取耳缘静脉血2 ml, 进行碱性磷酸酶含量测定。 2 结果 2.1 大腿骨密度测量结果 2.2 大鼠碱性磷酸酶含量测定结果 3 神经递质及其功能受体 骨质疏松症多发生于绝经后妇女及老年患者。随年龄增加, 骨丢失和骨折发生率明显增加。当骨的正常负荷减弱或消失时, 与外力负荷相对应的骨重建发生, 骨质萎缩, 机械强度下降。一些实验证实, P物质含量减少为特点的神经信号改变是影响骨重建的重要因素, P物质调节骨代谢、维持骨密度。 P物质是广泛分布于全身的神经递质, 主要分布于中枢神经系统和外周神经系统, 在人体多种骨组织内分布有P物质样神经纤维, 包括长骨、关节、牙齿等, 以代谢活跃的部位如骨膜、干骺端及骺板附近分布最多, 在骨干处的皮质和骨髓则相对较少。这些肽能神经主要与血管伴行, 有少数游离神经末梢伸出并止于骨膜衬里细胞层、骨髓细胞团等, 其作用的靶细胞为成骨细胞和破骨细胞等。 坐骨神经切断可导致大鼠废用性骨质疏松, 现已在骨细胞中检测出多种可外围释放的神经递质及其功能受体。失去神经调节因素可导致骨的负向平衡。局部神经递质的释放可以调节骨的重建, 单侧坐骨神经切断术可以损害对侧坐骨神经的神经信号系统并且导致对侧骨量的丢失。因此, 鉴定神经损伤后神经递质对骨重建的影响机制显得尤为重要。实验显示, 一侧坐骨神经切断的大鼠, 股骨近端骨骨密度迅速在4周后下降了约7%, 术后12周时骨密度下降约11%, 而股骨干术后12周时仅有3%的下降, 股骨远端骨密度则下降了16%。在神经切断术对侧肢体, 观察到相同方式的骨量丢失, 其股骨近端术后4周骨密度下降约6%, 在12周时, 股骨干骨密度下降了1%, 股骨远端骨密度下降了约9%。如果每日应用P物质受体 (NK1) 拮抗剂LY303870共2周, 则可导致对侧肢体更广泛的骨量丢失, 因此, P物质信号途径是维持失神经后骨密度的重要机制。同时, 一侧坐骨神经切断后可导致两侧胫骨内P物质含量约50%的下降, 说明P物质减少是神经切断后骨质疏松的原因之一。 我们通过动物实验证明:体外注射P物质可以明显改善坐骨神经切断术后大鼠骨密度, 而且作为骨重建活跃指标的碱性磷酸酶含量也有明显提高, 这从另一方面证明了P物质在骨重建中发挥着重要的作用。 实验组均比对照组改善, 两组之间差异有统计学意义 (P0.05) , 见表1。 实验组均比对照组上升, 两组之间差异有统计学意义 (P0.05) , 见表2。