一测多评法测定姜药材中4种姜酚类成分的含量.docxVIP

一测多评法测定姜药材中4种姜酚类成分的含量 生姜是姜科植物的干燥根系。它具有加热和散寒、回阳通脉、除湿和去粘液的功效。干姜的活性成分主要是姜酚类,包括6-姜辣素、8-姜辣素、10-姜辣素、12-姜酚等10余种成分。关于干姜的质量控制,2010年版《中国药典》仅以6-姜辣素作为质量控制指标,不能全面反映干姜药材及饮片的内在品质。文献报道也有以6-姜辣素、8-姜辣素及10-姜辣素为指标的多成分含量测定。但由于姜辣素类成分不稳定,很容易被氧化成姜烯酚、姜酮及相应的醛类成分,限制了这一方法的广泛应用。本文引入一测多评法对干姜进行多指标的质量控制,以6-姜辣素为内参物,通过建立其与8-姜辣素、10-姜辣素及6-姜酚间的相对校正因子进行含量计算,探讨一测多评法在干姜药材质量评价中应用的可行性。 1 材料表面 1.1 超声清洗仪测试 Agilent 1120高效液相色谱仪,Waters2695高效液相色谱仪,色谱柱UltimateTMXB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),Sepax Sapphire-C18(4.6mm×250 mm,5μm),DS-8510型超声波清洗器(上海生析超声仪器有限公司)。 1.2 姜科植物姜 干姜药材购自广州市药材公司中药饮片厂,经广东药学院中药学院程轩轩博士讲师鉴定为姜科植物姜Zingiber officinale(willd)Rosc.的干燥根茎。 1.3 生物科技研究 6-姜辣素(批号23513-14-6)购自北京金宝在线科技有限公司、10-姜辣素(批号P0131)、6-姜酚(批号P0621)购自上海纯优生物科技有限公司,8-姜辣素(批号F购自南通飞宇生物科技有限公司。实验所用试剂甲醇、乙腈为色谱纯,屈臣氏蒸馏水。 2 方法和结果 2.1 方法研究 2.1.1 流动相乙腈-1.1%磷酸水 UltimateTMXB-C18色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm),流动相乙腈(A)-0.1%磷酸水(B),洗脱梯度(0~20 min,60%~75%A,20~45min,70%~85%A),检测波长280 nm,流速0.6m L·min-1,柱温30℃。上述色谱条件下,各组分分离度良好,结果见图1。 2.1.2 对照品溶液的配制 分别取6-姜辣素、6-姜酚、8-姜辣素、10-姜辣素对照品适量,精密称定,甲醇溶解,配置成质量浓度分别为10.01,4.00,4.49,2.19g·L-1的对照品溶液。分别精密移取上述4个对照品溶液24,25,50,100μL置于1 m L量瓶中,加甲醇定容至刻度,即得混和对照品溶液,于4℃保存备用。 2.1.3 试验溶液的制备 2.1.4 进样分析 精密吸取上述混合对照品溶液0.5,1,2.5,5,7.5,10,15μL进样分析,每个浓度进样2次。以进样量对峰面积积分值进行回归,6-姜辣素、6-姜酚、8-姜辣素、10-姜辣素的标准曲线见表1。 2.1.5 采用回归因子计算 以6-姜辣素为内标,按公式分别计算6-姜酚、8-姜辣素、10-姜辣素对6-姜辣素的校正因子,结果见表2。 2.1.6 精密度试验,各节点点精密度试验,最终达到6-姜辣素的添加量2. 精密吸取同一供试品溶液10μL连续进样6次,记录峰面积,6-姜辣素、6-姜酚、8-姜辣素、10-姜辣素的精密度分别为0.35%,1.01%,0.48%,0.13%。 2.1.7 样品稳定性分析 精密吸取同一供试品溶液10μL分别于配后的0,2,4,8,12,24,48 h进样分析记录峰面积,6-姜辣素、6-姜酚、8-姜辣素、10-姜辣素稳定性的RSD分别为0.64%,1.01%,0.92%,0.49%,表明处理后的样品在48 h内稳定。 2.1.8 平均质量分数 称取干姜药材粉末约0.5 g共6份,精密称定,按供试品溶液处理方法制备样品,测定,结果6-姜辣素、6-姜酚、8-姜辣素、10-姜辣素的平均质量分数分别为8.97,1.26,2.61,4.03mg·g-1,RSD分别为0.87%,1.16%,0.53%,0.22%。 2.1.9 标准回归率 2.2 修正因素的重复回归 2.2.1 不同的设备和色谱柱的研究 2.2.2 相对校正因子 在经两个实验室进行试验UltimateTMXB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),不同实验室所得的相对校正因子差异较小,RSD在1.12%~2.86%。 2.3 测定指标的相对保留值 知道6-姜辣素的保留时间,利用待测成分对于6-姜辣素的保留时间及相对保留值,即可对峰进行定位,考察以上2个参数在不同仪器和不同规格色谱柱中的重复性,保留时间波动的RSD在2.42%~2.63%,见表4。各待测成分的相对保留值波动较小,RSD在0.53%~0.79%,见表5。因