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一测多评法测定预知子中多种三皂苷成分 预测子是属于木通科的植物的五叶树。三个a.thifonata（thunb.）koidz和白木通a.threat（thunb.）koidz。var.奥尔德结果。具有舒肝和胃、活血止痛、散结、利尿功效。用于脘胁胀痛、痛经经闭、痰核痞块、小便不利。三萜皂苷类成分是预知子中的主要成分,具有抗癌、抗菌、抗炎等广泛的生物活性。目前对预知子质量控制标准方面,王家明等对皂苷PK进行了HPLC分析,《中国药典》2010版将α-常春藤皂苷作为测定指标,而关于预知子中其他三萜皂苷的多成分测定尚未见报道。 由于中药成分的复杂性,多指标综合质量控制模式已成为中药质量评价的发展趋势。但在实际工作中,由于多种原因中药化学对照品常常很难获得,这就限制了一般外标法或内标法实现多指标质量控制。一测多评法(QAMS)利用中药有效成分内在的函数关系和比例关系,实现了采用一种易得对照品对多个成分的同步测定。该法在茶叶、大黄、人参等药材中得到发展和验证,黄连的一测多评标准已被《中国药典》2010年版收录。本实验采用一测多评法建立的校正因子,提高了方法的实用性,可用于预知子的质量评价,更准确、方便地实现多成分同步测定,更好地控制该药材质量。 1 提取物、乙腈、丙醇酸酯、常春藤皂苷元3-o--l-吡喃不断糖苷,分离和纯化 Waters高效液相色谱仪;Millipore Simplicity超纯水器;AUW220D型电子分析天平(上海天平仪器厂);AB135—S十万分之一天平(Mettler Toledo)。 乙腈(色谱纯),甲醇(分析纯)。常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷PD)、常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷X)、常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃木糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷B)、常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷A)由本实验室分离纯化,质量分数98%。预知子收集自不同产地,经江西中医学院杨世林教授鉴定为三叶木通Akebia trifoliate(Thunb.)Koidz.的成熟果实,见表1。 2 方法和结果 2.1 皂苷水处理子的质量评价 在一定的范围内成分的量(质量或浓度)与检测器响应成正比,可得响应因子f=A/C。在预知子的多指标质量评价时,以皂苷PD为内标,建立皂苷PD与其他3种三萜皂苷成分(皂苷X、B、A)之间的相对校正因子(RCF值,fsa,fsb,fsc…),通过相对校正因子计算皂苷X、皂苷B、皂苷A的量。同时用常规外标法进行同步测定,以验证计算值的正确性和可行性。 2.2 1个研究和多评价理论的研究 2.2.1 %磷酸法 色谱柱为Alltech Apollo C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(45∶55);体积流量为1.0 m L/min;检测波长为203 nm;柱温30℃;进样量20μL。在上述色谱条件下,各待测峰的分离度均大于1.5,理论塔板数大于5 000,色谱图见图1。 2.2.2 对照溶液的制备 2.2.4 l量瓶色谱条件的测定 精密量取对照品溶液各0.5、1、2、4、8、10 m L,分别置10 m L量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀。分别精密吸取上述各混合溶液10μL进样,按上述色谱条件测定。以峰面积(Y)对质量浓度(X)进行线性回归,得皂苷PD、皂苷X、皂苷B、皂苷A的标准曲线,见表2,各标准曲线在线性范围内线性关系良好。 2.2.5 相对校正因子rcf的计算 2.2.6 峰面积测定次数 精密吸取同一供试品溶液(6号),在上述色谱条件下,连续进样6次,测定峰面积。皂苷PD、皂苷X、皂苷B和皂苷A的峰面积RSD分别为1.9%、2.7%、2.0%、1.5%。表明仪器的精密度良好。 2.2.7 皂苷pd、皂苷x、皂苷a峰面积的rsd 取2号供试品溶液,室温下放置,分别于0、2、4、6、8、10、12、24 h测定,皂苷PD、皂苷X、皂苷B和皂苷A峰面积的RSD分别为2.7%、2.1%、1.9%、1.2%。表明供试品溶液在24 h内稳定。 2.2.8 酶活剂质量分数 称取2号样品粉末6份,按“2.2.3”项下方法操作,在上述色谱条件下进行分析测定,计算皂苷PD、皂苷X、皂苷B和皂苷A质量分数的RSD分别为2.5%、2.7%、1.7%、1.8%。表明该方法的重复性良好。 2.2.9 加样回收率测定 取已测定的2号样品共9份,每份取约0.5 g,精密称质量,3份为1组,每3组按低、中、高质量浓度分别精密加入相当于药材50%、100%、150%的对照品溶液,依“2.2.3”项下方法操作,测定,计算加样回