一测多评法在栀子金花丸质量评价中的应用.docxVIP

一测多评法在栀子金花丸质量评价中的应用 长期以来，中药的质量主要通过单一指标来控制，这很难真正反映中医的多效性和完整性。中药多靶点的作用特点要求对其进行多成分质量控制, 因此多成分同步测定的质量控制模式应运而生, 但商品化对照品的供不应求和多指标控制高昂的检测费用限制了该模式在实际生产、科研和监管领域的应用。“一测多评”中药质量评价模式为解决该矛盾提供了新思路。该模式提出后在单味中药材[3,4,5,6,7,8,9,10,11]和中药复方制剂的质量控制研究中得到了广泛应用, 但均以同一类型化合物的质量控制研究居多。本研究以栀子金花丸中的黄连生物碱、黄芩黄酮和大黄游离蒽醌3种不同结构类型的10个化学成分为研究对象, 探讨“一测多评”技术在中成药多组分质量控制中应用的技术可行性和方法适用性。 栀子金花丸始载于《宣明论方》, 由栀子、黄芩、大黄、黄连、黄柏、金银花、知母、天花粉8味中药组成, 栀子金花丸具有清热泻火、凉血解毒的功效, 用于肺胃热盛、口舌生疮、牙龈肿痛、目赤眩晕、咽喉肿痛等。目前的文献报道中对栀子金花丸的质量控制研究主要是借助常规HPLC进行同类型化合物的含量测定, 2010年版《中国药典》中也仅以栀子苷为检测指标, 难以真正体现和保证栀子金花丸的内在质量。依据栀子金花丸的功效、适应症及各单味药所含成分已知的药理作用推测, 黄连生物碱、黄芩黄酮和大黄游离蒽醌应为其主要药效成分, 因此对小檗碱、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚等10个成分进行质量控制可有效地保证该药的质量和药效。 1 试剂和仪器 Shimadzu LC20A高效液相色谱仪, 包括LC-20AT溶液传输单元, SIL-20A自动进样器, SPD-M20A二极管阵列检测器, LC Solution色谱工作站 (日本岛津公司) ;Waters Alliance高效液相色谱仪, 包括2695溶剂管理系统, 2996二极管阵列检测器, Empower2色谱工作站 (美国WATERS公司) 。Syncronis C18色谱柱 (4.6mm×250 mm, 5μm) , Welchromue3ebC18色谱柱 (4.6mm×250 mm, 5μm) , SpursilTMC18色谱柱 (4.6 mm×250 mm, 5μm) , Accurasil C18色谱柱 (4.6 mm×250 mm, 5μm) 。 对照品盐酸小檗碱 (批号110713-200911, 质量分数以86.8%计) 、黄芩苷 (批号110715-201016, 质量分数以94.0%计) 、黄芩素 (批号111595-200905) 、芦荟大黄素 (批号110795-201007) 、大黄素 (批号110756-200110) 、大黄酚 (110796-200716) 、大黄酸 (批号110757-200206) 和大黄素甲醚 (批号110758-201013) 均购自中国食品药品检定研究院, 供含量测定用;汉黄芩苷 (批号H-019-110325) , 汉黄芩素 (批号H-029-111222) 购自瑞芬思生物科技有限公司, HPLC级, 纯度≥98%。甲醇、乙腈为HPLC级, 美国Fisher公司;水为哇哈哈纯净水, 其余试剂均为分析纯。 药品栀子金花丸为来源于各地药品零售商店的商品, 见表1。 2 方法和结果 2.1 多因素联合评价的建立和方法研究 2.1.1 醇a-乙腈-0.2%磷酸溶液法 Syncronis C18色谱柱 (4.6 mm×250 mm, 5μm) , 流动相甲醇 (A) -乙腈 (B) -0.2%磷酸溶液 (C) , 梯度洗脱, 0~60 min, 40%~4%A, 0%~60%B;60~90 min, 4%~10%A, 60%~85%B;流速1 m L·min-1, 柱温30℃, 检测波长254 nm。色谱图见图1。 2.1.2 超声处理法 取栀子金花丸粉末 (过40目筛) 约0.2 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇25 m L, 称定质量, 超声处理 (功率250 W, 频率40 k Hz) 30 min, 取出放至室温, 再称定质量, 用甲醇补足减失的质量, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 过0.22μm微孔滤膜, 即得。 2.1.3 对照品溶液的制备 取对照品盐酸小檗碱、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、汉黄芩素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚适量, 精密称定, 加甲醇制成每1 m L分别含上述对照品0.054 7, 0.041 0, 0.054 0, 0.219 0, 0.005 68, 0.073 0, 0.005 30, 0.006 40, 0.017 1, 0.005 20 mg的混合对照