低双乙酰抗病毒啤酒酵母工程菌的构建及发酵特性研究.docxVIP

低双乙酰抗病毒啤酒酵母工程菌的构建及发酵特性研究 双丁是啤酒中的主要口感材料，啤酒的限制很低。如果双丁的浓度超过规定的阈值，则会产生不愉快的味道。双乙酰是由酵母菌异亮氨酸_缬氨酸生物合成途径中的中间产物α_乙酰乳酸渗透到胞外经非酶促氧化脱羧反应生成的。一般在啤酒发酵后期还原双乙酰需要约5～10d的时间,因而双乙酰的形成与消除是啤酒风味成熟的重要限速步骤。随着对酵母形成双乙酰机理及其分子遗传学的逐渐了解,通过基因工程的手段修饰异亮氨酸_缬氨酸生物合成途径,从而降低双乙酰的形成成为可能。ILV2基因编码的α_乙酰乳酸合成酶活性与双乙酰前体α_乙酰乳酸的含量水平密切相关。 γ_谷氨酰半胱氨酸合成酶基因(GSH1)所编码的γ_谷氨酰半胱氨酸合成酶是谷胱甘肽合成途径中的限速步骤,增强γ_谷氨酰半胱氨酸合成酶的活性可以增加谷胱甘肽的形成量,可以提高啤酒的抗老化能力。 重组DNA技术的飞速发展为通过基因工程技术改良工业酵母菌提供了极大的便利。在酵母菌遗传修饰中,根据是否引入外源基因,重组菌株被分为自克隆和非自克隆菌株。自克隆菌株中不含有任何外源DNA片段,因此是生物安全的。本文通过自克隆技术构建了低双乙酰抗老化的啤酒酵母工程菌,并对其发酵特性进行了研究。 1 材料和方法 1.1 酵母菌u2004 大肠杆菌DH5α[supE44 ΔlacU169(Ψ80lacZΔM15)hsdR17recA1e