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n-甲基-d-天冬氨酸受体与细胞内组织型谷氨酰胺转移酶关系的研究 脑出血是老年人常见的疾病，发病率、死亡率和致残率较高。这种疾病的神经损伤机制尚不完全清楚。迄今研究多集中于凝血过程中产生的凝血酶的神经毒性作用,认为凝血酶不仅可以引起脑水肿,可以诱导神经细胞凋亡,还能通过激活蛋白激酶激活受体(PAR)-1改变神经细胞N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的敏感性。凝血酶激活PAR-1可以引起大鼠脑皮质细胞内组织型谷氨酰胺转移酶(tTG)的蛋白表达和酶活性增高。为了解tTG这一多功能酶是否参与了凝血酶影响NMDA受体敏感性的机制,我们利用凝血酶作用于原代培养的大鼠小脑颗粒细胞,tTG抑制剂单丹磺酰尸胺(MDC)干预,对这一问题进行了研究。 实时荧光定量检测 1. 材料与仪器:Wistar大鼠鼠婴购于武汉大学医学院动物室;细胞培养板购于美国Falcon公司;DMEM培养基、胎牛血清和胰蛋白酶购于美国Gibco公司;凝血酶、阿糖胞苷和NMDA购于美国Sigma公司;M-MLV逆转录试剂盒购于美国Promega公司;Taq DNA聚合酶购于中国华美生物工程公司;其他试剂为国产分析纯。使用EPICS ALTRAⅡ流式细胞仪(BECKMAN COULTER公司,美国),CellQuest软件获取数据,Modifit LT软件进行分析;BH-2显微镜(OLYMPUS公司 日本);二氧化碳培养箱(