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还原型和氧化型谷胱甘肽在磁性Fe 谷冈甘醇是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合的三醇。半胱氨酸基是其活性物质，但基很容易引起两个欧冈甘醇的偶联。因此，谷冈甘醇有两种形式：还原型（gsh）和氧化型（gssg）（如图1所示）。在生理条件下，大多数谷冈甘醇是还原型的。谷冈甘醇还原酶可以激活两种形式之间的交换。谷胱甘肽具有多种重要的作用,如抗病毒作用、抗肿瘤作用、保护肝脏作用等。 磁性无机纳米粒子(如γ＿Fe2O3、Fe3O4等)既有常见无机纳米粒子的物理化学特性,又有磁性,在医疗医药、生物化学及工业应用等领域显示出广泛的应用前景,成为一个研究热点。 最近,将特异性强的导向肽(由10～20个氨基酸组成)与纳米颗粒相结合以开发其在肿瘤诊断、治疗及靶向给药中应用的研究受到重视。Akerman等研究了对肺癌具有特异性的导向肽与ZnS包覆的CdSe纳米颗粒相偶联的复合体在动物体内的定向,其结果表明导向肽与纳米颗粒的结合将在疾病的诊断、治疗及靶向给药方面有广泛的应用前景。将导向肽与磁性纳米颗粒相结合,能发挥双导向(磁导向和生物导向)的功能。因此,研究肽在磁性纳米颗粒上的结合组装有很大的实际应用价值。但由于十几个氨基酸组成的肽,其化学合成步骤繁琐、制备过程要求苛刻、价格高,为此笔者选择了一种常见、普遍而在生物学上又有重要应用和研究价值的小分子肽———谷胱甘肽作为替代物进行研究。研究谷胱甘肽在磁性粒子上的吸附组装的行为,对了解由更多氨基酸组成的具有导向功能的肽在磁性粒子上的吸附组装行为有重要的指导意义。本文通过化学共沉淀法合成了磁性载体———纳米Fe3O4,研究了谷胱甘肽在Fe3O4磁性粒子上的直接吸附组装行为及相关热力学函数,并进行了表征,考察了修饰活化试剂二环己基碳化二亚胺和pH对吸附组装的影响,简单讨论了吸附的机理。 1 实验部分 1.1 实验试剂和试剂 Unico UV＿2802S型紫外可见分光光度计(尤尼柯(上海)仪器有限公司);PHS＿2C型酸度计(上海伟业仪器厂);THZ＿恒温振荡器(江苏太仓市实验设备厂);F＿GZX101＿1BSⅡ电热恒温鼓风干燥箱(上海新苗医疗器械制造有限公司);氧化型谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽(上海蓝生科技发展有限公司);2,9＿二甲基＿1,10-菲啉(简称新铜试剂,中国上海三爱思试剂公司);二环己基碳化二亚胺(国药集团化学试剂有限公司);磷酸、乙醇、磷酸氢二钠、柠檬酸(中国医药集团上海化学试剂公司)均为分析纯。 1.2 酶法分离 Fe3O4采用共沉淀法制得,即在25℃、氮气保护和快速磁搅拌的条件下向亚铁盐和铁盐混合溶液中滴加0.1mol L的氢氧化钠溶液,直至pH为11,继续搅拌2h,在80℃下陈化2h,经洗涤和磁分离直至中性,过滤抽干后在真空干燥箱内80℃干燥24h,研磨备用。 1.3 标准曲线的绘制 谷胱甘肽测定采用紫外分光光度法,在新铜试剂＿谷胱甘肽＿乙醇体系中进行显色反应后测定。先准确称取0.1gGSH,以水溶解至1000mL得到0.1mg mL的标准溶液。称取62.5mg CuSO4·5H2O,以20～30mL水溶解,再称取135.8mg新铜试剂,用8mL无水乙醇溶解,二者充分混合后以水定容至250mL,作为显色剂。于25mL容量瓶中,加入适量的谷胱甘肽标准溶液、3mL显色剂和7mL无水乙醇,摇匀,以水定容,稳定30min。用1cm比色皿,以试剂空白作参比,于456nm处测定试剂吸光度值,制作标准曲线。氧化型谷胱甘肽测试时加入0.1g FeSO4·7H2O,将其还原成GSH后按照还原型谷胱甘肽的测试方法测试。 1.4 吸附量的确定 在一系列50mL磨口锥形瓶中分别加入50mg Fe3O4和25mL不同浓度的谷胱甘肽溶液,分别在20、40、60℃温度下以220r min的转速振荡24h(事先吸附平衡实验证实24h已达到充分的平衡,谷胱甘肽浓度不再发生变化),过滤,按照上述方法处理后用紫外分光光度计在456nm处测定试剂的吸光度值,根据标准曲线得出吸附后溶液的平衡浓度,由以下公式计算出Fe3O4对还原性和氧化型谷胱甘肽的吸附量。吸附量计算公式为: 式中q为吸附量(mg g),V为被吸附溶液的体积(L),C0为吸附前的溶液浓度(mg L),Ce为平衡浓度(mg L),m为Fe3O4的用量(g)。 1.5 活性炭-碳氧基亚胺对谷胱甘肽吸附量的影响 在一系列50mL磨口锥形瓶中加入50mg Fe3O4和25mL浓度1mg mL的还原性或氧化型谷胱甘肽,再加入不同质量的碳化二亚胺配制成碳化二亚胺含量不同的混合溶液,然后一同置于恒温振荡器中,在20℃下以220r min的转速振荡24h至平衡,测定各自的吸附平衡浓度,计算相应的吸附量,作图分析碳化二亚胺含量对谷胱甘肽吸附的影响。 1.6 kno3-ro3o4溶液的制备