三波长-分光光度法测定山楂叶和果中黄酮的含量.docxVIP

三波长-分光光度法测定山楂叶和果中黄酮的含量 山楂是蔷薇科植物的野山楂果实。中医认为山楂果具有健胃消食、降压降脂之功效,是保健食疗的佳品。 山楂叶中黄酮类化合物含量较高,种类较多,山楂是我国东北地区典型的药、食两用植物,鞍山地区山楂资源十分丰富,当地居民用其叶、果泡茶的习惯具有悠久的历史。而这些人群中患高血压等心脑血管疾病的人甚少。为了更好的开发利用山楂这一野生资源,作者采用三波长分光光度法,对山楂叶和果的总黄酮含量进行了测定。 1 总黄酮含量测定 在黄酮类化合物的紫外吸收光谱中,主要是由300~400 nm之间的吸收带I和240~280 nm之间的吸收带II组成。因为山楂叶和果中含有的其它成分在带I和带II范围内均有一定程度的吸收,因此对总黄酮的含量测定产生干扰。加入铝盐后使黄酮类化合物与铝离子形成稳定的化合物,吸收带I会产生明显红移,同时吸光度也大大增加。因此,选择铝配合物显色体系来测定样品中总黄酮的质量浓度。 三波长-分光光度法的基本原理如图1所示:在一吸收光谱曲线上,可以适当选择3个波长λ1、λ2、λ3处分别测定吸光度A1 、A2和A3 ,由图1可知。 ΔA=A2?(Nλ2+MN)=A2?mA1+nA3m+n=A2?(λ2?λ3)A1+(λ1?λ2)A3λ1?λ2={ελ2?(λ2?λ3)ελ1+(λ1?λ2)ελ3λ1?λ2}bcΔA=A2-(Νλ2+ΜΝ)=A2-mA1+nA3m+n=A2-(λ2-λ3)A1+(λ1-λ2)A3λ1-λ2={ελ2-(λ2-λ3)ελ1+(λ1-λ2)ελ3λ1-λ2}bc(1) 式中:e为待测组分在各波长处的摩尔吸光系数;b为光程;c为待测组分的摩尔浓度。由式(1)可知,ΔA值与待测组分的浓度成正比,可以用于对待测组分的测定。从图1又知,当选择的干扰组分的3个波长对应的R、M、P3个点在一条直线上时,干扰组分的ΔA=0,则测得的ΔA值与该干扰组分浓度无关。 三波长-分光光度计法测定黄酮含量,能有效地消除吸收峰不对称给黄酮定量分析造成的影响,并校正了干扰组分的吸收光谱具有可能是散射造成的背景(散射与波长有关,在短波处散射较强)线性吸收产生的基线倾斜,提高了定量分析的准确度。 2 实验部分 2.1 其它试剂及仪器 山楂叶和果,采自辽宁千山; 芦丁标准品:上海试剂二厂产品; 其它试剂均为国产分析纯。紫外分光光度计:北京普析通用仪器有限责任公司产品;KG-250型渣油超声波清洗器:昆山市超声波仪器厂产品。 2.2 黄酮的定性鉴定 首先取山楂叶和果,溶于体积分数70%乙醇溶液,与HCl-Mg、 AlCl3、Pb(Ac)3反应均为阳性,表明其中含有黄酮类化合物。 2.3 供试品储备液i 取山楂叶、果细粉1.000 0 g,置索氏提取器中,加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色,弃去三氯甲烷液,药渣除去三氯甲烷,加甲醇继续提取至无色,提取液在鼓风干燥箱中蒸干,残渣加体积分数50%乙醇溶液溶解,转移至50 mL容量瓶,加体积分数50%乙醇溶液至刻度,摇匀,作为供试品储备液I。取供试品储备液I,滤过。准确量取滤液5 mL .置于25 mL 容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为供试品储备液Ⅱ。 2.4 黄酮含量的测定 将山楂叶和果及芦丁标准品在适当的介质条件下,与质量分数1%三氯化铝反应形成络合物而显颜色。显色后的对照品溶液和样品溶液的吸收光谱如图2。表明它们均在417 nm 处均有最大吸收峰,因此可用芦丁作为标准品测定山楂叶和果中黄酮的含量。 准确吸取卢丁标准储备液1.0 mL分别注入10 mL容量瓶中,加质量分数1%的三氯化铝溶液,充分混合至刻度,用1 cm的比色皿在波长200~532 nm范围内扫描,绘制出其吸收曲线(见图3),用作图法确定3个测定波长分别为λ1=463 nm、λ2=417 nm、λ3=382 nm。在测定波长处分别测定用质量分数1%的三氯化铝溶液定容过的黄酮溶液的吸光度值,给出ΔA值,并计算出相应的浓度值。 3 结果与讨论 3.1 标准曲线的绘制 准确吸取芦丁标准溶液1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0 mL分别置于10 mL容量瓶中,加质量分数1%AlCl3溶液,充分混合至刻度,在其波长为λ1=463 nm、λ2=417 nm、λ3=382 nm分别测得吸光度,按公式(1)计算ΔA值,求得ΔA与浓度关系的回归方程为:ΔA=88.795C-0.206 0,根据ΔA与质量浓度的关系可绘制出线性很好的标准曲线。求得相关系数r=0.999 4,说明黄酮的质量浓度在0~40 μg/mL范围内,分别在波长为λ1=463 nm、λ2=417 nm 、λ3=382 nm处测吸光度时,则ΔA与质量浓度C之间呈良好的线性关系,可按标准曲线法进行定量分析。 3.2 黄酮的总含量的测定 将