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6-姜酚的半制备高效液相色谱分离与结构确证 现代药理实验表明，6-姜酚不仅具有良好的应用前景，而且具有抗炎、保肝、健脑、抑中枢神经等功效。但因其化学性质不稳定,分离困难,所以到目前为止,只有美国Biomol公司有毫克级的6-姜酚单体出售,且价格不菲。本人应用半制备高效液相色谱技术成功地从生姜中分离出了6-姜酚,并综合应用UV、FTIR、NMR和GC-MS技术对6-姜酚进行了结构确证。 1 实验部分 1.1 光谱、质谱和核磁共振光谱 紫外可见分光光度计Lambda 7型。狭缝宽度:2 nm;扫描范围:190~400 nm;扫描速度;240 nm·min-1;样品制备:用φ(甲醇∶水∶冰醋酸)=50∶49∶1稀释至一定浓度。 FT-IR红外吸收光谱仪EQUINOX 55型,采用KBr压片法。 GC-MS仪TRACE 2000型,含DB-5MS色谱柱(30 cm×0.25 mm,0.25 μm)。采用电子轰击电离源(EI),全扫描方式,样品经三甲基硅烷化处理。程序升温:炉温50 ℃持续4 min,10 ℃·min-1升到100 ℃;8 ℃·min-1升到144 ℃;4 ℃·min-1升到160 ℃;8 ℃·min-1升到200 ℃;10 ℃·min-1升到310 ℃。进样口温度:280 ℃;载气:氦气,流速1.0 mL·min-1。 超导核磁共振谱仪AVANCE AV 500 MHz型。溶剂:CDCl3,TMS作内标。 1.2 样品 6-姜酚,99.61 %,自制。 2 结果与讨论 2.16 -姜酚收带 6-姜酚的紫外光谱图见图1。230 nm处的峰属K吸收带,由π-π*跃迁产生,说明6-姜酚结构中存在共轭体系。 280 nm处的弱峰为n-π*跃迁产生,属R吸收带,是羰基化合物的特征谱带,说明6-姜酚结构中存在羰基。 2.26 吸收峰的确定 6-姜酚的红外谱图见图2。1704.92 cm-1处的吸收峰为CO伸缩振动吸收峰。 1603.61 cm-1和1516.52 cm-1处的吸收峰为苯环骨架振动,853.06 cm-1和814.83 cm-1处的吸收峰为苯环的定位峰(1,2,4三取代)。 3420.41 cm-1、1235.98 cm-1、1035.04 cm-1处的吸收峰为羟基OH伸缩振动吸收峰。 1271.79 cm-1处的吸收峰为烷基芳基醚COC上的不对称CO伸缩振动吸收峰。 2931.05 cm-1和2858.40 cm-1处的吸收峰为亚甲基CH2的特征吸收峰,720 cm-1处的吸收峰是C(CH2)nC上的CH面内摇摆振动(n≥4),这些峰的存在说明6-姜酚结构中不仅有亚甲基,而且至少有4个亚甲基是相连的。 1372.15 cm-1处的吸收峰为孤立甲基CH3的特征吸收峰,由CH对称弯曲振动引起。 2.36 -姜酚衍生物的鉴定 6-姜酚的一维核磁共振13C谱见图3,一维核磁共振1H谱见图4。 解析图3可知,谱图中的17条谱线说明6-姜酚有17个C。 化学位移δ在14.026×10-6的单峰说明6-姜酚中有端甲基CH3;δ在22.595×10-6~49.360×10-6范围内的峰说明有亚甲基CH2;δ在67.690×10-6处的峰说明有甲氧基OCH3;δ在111.022×10-6~146.480×10-6范围内的峰说明有苯环;δ在211.477×10-6处的峰说明有羰基CO。 解析图4可知,从峰面积推测该化合物有26n(n为整数且n≥1)个H,考虑到它有17个C,n只可能为1,所以该化合物含有26个H,与6-姜酚分子中含有26个H相符。 化学位移δ在0.88826×10-6~0.91573×10-6范围内的3个峰说明6-姜酚有端甲基CH3;δ在1.27256×10-6~1.49208×10-6范围内的峰说明有多个相邻的亚甲基CH2;δ在2.48396×10-6~3.06913×10-6范围内的峰说明有羰基CO;δ在3.88331×10-6处的单峰说明有甲氧基OCH3;δ在4.02687×10-6~4.06944×10-6范围内的峰说明可能有醇羟基OH;δ在5.65558×10-6处的峰说明可能有酚羟基OH;δ在6.66776×10-6~6.84944×10-6范围内的峰说明有被取代的苯环。 综合图3、图4分析结果可知:6-姜酚分子中有17个C 、26个H,结构中有1个端甲基、1个三取代苯环、1个甲氧基、1个羰基和多个亚甲基,可能还有1个酚羟基和1个醇羟基。 2.46 合理中性碎片丢失 6-姜酚的质谱图见图5。 峰m/z 438.3质量数最大且符合氮律,(438.3-423.2)=15,属合理中性碎片丢失,因此m/z 438.3可能是分子离子峰。假定m/z 438.3是分子离子峰的推断成立,则该化合物分子量M=438.3-2