加味圣愈汤对无排卵大鼠子宫平滑肌活动的影响.docxVIP

加味圣愈汤对无排卵大鼠子宫平滑肌活动的影响 月经不调是妇科疾病的常见病。月经后量和月经后的常见量。如果没有及时的治疗，很容易导致闭经和妊娠。圣愈汤出自《兰室秘藏》卷下,又称参芪四物汤。加味圣愈汤是全国名老中医妇科专家杨家林教授在本方基础上加枸杞子、覆盆子、菟丝子、肉苁蓉等补肾中药所创制,具有补肾养血调经之功效,主治肾虚血亏型月经推后、量少,临床疗效卓著。本研究拟采用整体和离体试验从下丘脑-垂体-卵巢轴探讨加味圣愈汤的调经作用及其作用机制。 1 材料和方法 1.1 不同浓度工艺样品,样品含量测定 加味圣愈汤浸膏粉,由成都康奥药物研究所提供,中试生产,批号060503,每g相当于原生药5.691g。分别选黄芪、白芍、熟地黄建立薄层色谱鉴别方法,以HPLC法测得每g浸膏粉中芍药苷含量不低于2.86mg。试验时取蒸馏水配制成0.106、0.053、0.0265g药 粉/ml药液。己烯雌酚片,合肥久联制药有限公司生产,批用蒸馏水配制成0.008g/ml药液。乌鸡白凤丸,北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂生产,批号6035124,用蒸馏水配制成0.4g/ml药液。枸橼酸氯米芬胶囊,上海衡山药业有限公司生产,批号060701,用蒸馏水配成0.8mg/ml药液。 1.2 动物质量合格 SD大鼠,9日龄,或体重(200±20)g,全雌,成都中医药大学实验动物研究中心提供,动物质量合格证号:SCXK(川)2004-11,检疫后备用。健康成年日本大耳白兔,体重(1.5±0.5)kg,雌性未孕,四川省实验动物专委会养殖场提供,动物质量合格证号:SCXK(川)2004-14,检疫后备用。 1.3 大鼠fsh、lh的检测 己烯雌酚注射液(上海通用药业股份有限公司,批号030903,规格1mg/ml);丙酸睾丸酮注射液(天津金耀氨基酸有限公司,批规格25mg/ml);缩宫素注射液(成都海普平原药业有限公司,批号060862,规格10U/ml);大鼠E2、P、FSH、LH放射免疫测定试剂盒(天津市协和医药科技有限公司,批;氨基甲酸乙酯(商品名乌拉坦,成都科龙化工试剂厂,批临用时用蒸馏水配成20%溶液);注射用青霉素钠(华北制药股份有限公司,批号B0511001,规格80万U/支,临用前用生理盐水配成20万U/ml药液)。 1.4 组织快速处理试验 XDS-1型倒置显微镜(重庆光学仪器厂);XH6010A型γ计数仪(西安二六二厂);TSJ-1A型自动组织脱水机(天津天利航空机电有限公司);DCSK-Ⅲ型超声波人体组织快速处理仪、BMJ-Ⅲ型包埋机、BMJ-Ⅲ型病理组织包埋冷冻台、PHY-Ⅲ型病理组织漂烘仪(常州市中威电子仪器厂);RM 2235切片机(德国Leica公司);BH-2型显微镜(日本Olympus 公司);组织细胞分析诊断系统(Zoneking softronics有限公司);BL-420E生物机能实验系统(成都泰盟电子有限公司);JH-2肌张力传感器(北京航空医学工程研究所)。 1.5 方法 1.5.1 阴道缺失大鼠血清造模及免疫 雌性大鼠80只,待适应环境后,20%乌拉坦腹腔注射1g/kg麻醉,俯卧位固定,参考文献方法行双侧卵巢切除术。另取10只大鼠行假手术,即手术时暴露卵巢后仅切除小块脂肪,不切除卵巢,作为假手术组(N=10)。术后连续3d注射青霉素4万U/(只·次)预防感染。术后第5d对去卵巢大鼠逐只进行阴道涂片,每日1次,连续10d。出现阴道脱落细胞角质化周期性变化的大鼠视为造模失败淘汰,没有明显周期性变化者视为造模成功,结果共筛选到59只造模成功大鼠,将之按体重随机分为6组按如下剂量给药:模型对照组、己烯雌酚组8mg/kg、乌鸡白凤丸组4.00g/kg、加味圣愈汤高剂量组1.06g/kg、中剂量组0.53g/kg和低剂量组0.265g/kg,按10ml/kg体重灌胃,1次/d,连续5周,模型对照组和阴性对照组灌胃等剂量蒸馏水。末次给药前10d再次行阴道涂片2个周期,阴道脱落细胞有周期性变化者于动情间期股动脉采血,其余动物则在末次给药后24h取标本。每组随机取8只动物的血清放射免疫法测定血清E2、P水平;所有动物处死后剖取子宫称重,然后用10%甲醛溶液固定,包埋,切片,HE染色,行病理组织学检查。 1.5.2 动物分组、给药及结果 依据俞瑾等报道的方法,取同批出生9日龄雌性大鼠92只皮下注射丙酸睾丸酮1.25mg/只(0.05ml/只) 制备ASR模型,其中随机取15只颈背部皮下注射无菌色拉油(0.05ml/只)作为溶剂对照。待70日左右阴道开口,连续阴道上皮细胞涂片10d观察阴道上皮细胞角质化情况,以阴道上皮细胞角质化无明显周期性变化者视为ASR模型制作成