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姜油树脂的制备及其抗氧化活性研究 生姜是生姜科生姜的生根。它是人们最常用的香料和香料。它也是中国传统的中药。它具有散寒解表、加热停止呕吐、回阳通脉、除湿消粘液的功效。现代药理研究表明生姜具有抗氧化、改善脂质代谢、降血脂、改善心脑血管系统功能、防辐射、抗炎、抗微生物、抗肿瘤、降血糖等作用。 姜油树脂是通过溶剂提取生姜得到的产品,包含了生姜中几乎全部的香味和口味成分,可作为高品质的浓缩调味料替代传统香辛原料,应用于食品加工及烹调。此外,姜油树脂中丰富的姜酚、黄酮等成分,使其在开发天然抗氧化剂、天然抗菌剂及医疗保健品等方面具有广阔的应用前景。本研究通过乙醇浸提法制备姜油树脂,以多种体系测试其抗氧化活性,为其进一步研究及开发天然、高效的食品抗氧化剂奠定基础。 1 材料和方法 1.1 试剂及仪器 生姜、大豆油:购自市场;芦丁:国药集团化学试剂有限公司;香草醛:中国湖南南化化学试剂厂;无水乙醇、邻苯三酚、Fe SO4、H2O2、水杨酸等试剂均为分析纯。 HH-S数显恒温水浴锅:常州市国立试验设备研究所;UV-6300紫外/可见分光光度计:上海美谱达仪器有限公司;743 Rancimat型油脂酸败仪:瑞士万通公司。 1.2 方法 1.2.1 姜粉提取液的制备 选取无腐烂、无霉变的生姜适量,用清水洗净后沥干,切片后于60℃烘干至水分≤15%,粉碎过60目。称取一定质量姜粉,加入无水乙醇于60℃搅拌回流提取1 h,浸提料液比为1∶15(g/m L)。过滤,再用少量乙醇洗涤残渣,合并为第一次的提取液。残渣再用无水乙醇在相同条件下提取两次。分别测定3次提取液的姜酚和黄酮含量,比较3次提取的得率差异。 1.2.2 姜酚和黄酮的含量测定 1.2.2. 标准曲线的绘制 以香草醛为标准样测定姜油树脂中姜酚含量,参考文献3的方法并加以改进。 准确称取0.100 g香草醛,用无水乙醇定容至100 m L,再吸取1.0 m L,用无水乙醇定容至100 m L,得10μg/m L的香草醛标准溶液。吸取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 m L标准溶液置于试管中,相当于0、10、20、30、40、50μg香草醛,再分别加入5.0、4.0、3.0、2.0、1.0、0.0 m L的无水乙醇,混匀。以无水乙醇为空白,在波长280 nm处测定其紫外吸光度,以吸光度(A)为纵坐标,体系中香草醛质量(μg)为横坐标,绘制标准曲线见图1,得回归方程A=0.013 6M+0.006。 1.2.2. 文献的方法 以芦丁为标准样测定姜油树脂中总黄酮含量,参考文献的方法。 以吸光度(A)为纵坐标,体系中芦丁质量(μg)为横坐标,绘制标准曲线见图2,得回归方程A=0.571 M-0.006 3。 1.2.3 抗逆效应测定 1.2.3. 清除feo3-aj/a0 采用Fenton体系进行测定。将姜油树脂用无水乙醇配制成不同浓度梯度。取2 m L配置的溶液,依次加入6 mmol/L的Fe SO4溶液2 m L和6 mmol/L的H2O2溶液2 m L,摇匀后静置10 min,再加入6 mmol/L水杨酸2 m L,摇匀,静置30 min后在波长510 nm处测其吸光度。 清除率S=[1-(Ai-Aj)/A0]×100% 式中:A0为空白对照;Ai为加入姜油树脂后的吸光度;Aj为不加水杨酸时姜油树脂本底的吸光度。 1.2.3. 邻苯三酚自氧化率测定方法 采用改良的邻苯三酚自氧化法进行测定。取50 mmol/L磷酸缓冲液(p H8.34)4.5 m L,加1 m L姜油树脂乙醇溶液,加入45 mmol/L邻苯三酚溶液10μL,立刻计时并迅速摇匀,然后在波长325 nm下测定吸光度,对照管用10 mmol/L的HCl溶液10μL代替邻苯三酚溶液。1 min后记数据,每隔30 s记一次,一直记到第4 min。不加姜油树脂,加入1 m L无水乙醇,测定邻苯三酚自氧化率。 自氧化率=(第4 min的吸光度-第1 min的吸光度)/3 清除率S=[(邻苯三酚自氧化率-加样后的自氧化率)/邻苯三酚自氧化率]×100% 1.2.3. 抗氧化活性的测定 采用CDM法,用瑞士万通743油脂酸败仪测定油脂氧化的诱导时间。 取0.1 g姜油树脂加入9.9 g大豆油中,加热,搅拌使溶解。再分别取0.2、0.4、0.6、0.8 g混合物出来,加入豆油中使总重量达到20.0 g,即豆油中姜油树脂的质量分数分别为0.01%、0.02%、0.03%、0.04%。分别取3 g最终混合物进行测定,同时以添加0.02%TBHQ的豆油为对照,并以不添加任何抗氧化剂的豆油为空白。试验条件:测试温度120℃,空气流量9 L/h。以稳定因子(F)值的大小来评价抗氧化剂的抗氧化效果。 式中:IPx为添加抗氧化剂后油脂氧化的诱导时间