姜酮-分子印迹聚合物的合成及吸附性能研究.docxVIP

姜酮-分子印迹聚合物的合成及吸附性能研究 生姜属于生姜科。它也用于治疗疾病、消化疾病、突变疾病、抗风湿疾病、运动病、肿瘤和抗寒疾病。它的提取物被用于治疗癌、消化疾病、心血管疾病、溃疡、hiv-1和其他疾病。相关研究资料表明,上述生物活性主要决定于生姜中辣味成分—姜酚类物质。姜酚类物质主要包括6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚,其中6-姜酚占60%左右。 为了避免传统姜酚提取方法的弊端并获得高纯度的6-姜酚,本实验利用具有预定性、识别性和实用性等优良特点的分子印迹技术进行6-姜酚的提取。利用分子印迹技术制备而成聚合物被称为分子印迹聚合物(MIPs),它是一种人工合成的材料,在形状、体积等方面与模板分子具有良好的空间互补性,对模板分子具有量身定做的专一性结合特征,因此能够有效地分离目标分子,另外M IPs具有很好的稳定性、容易制备且成本低,已在传感器,色谱,天然产物的提纯,痕量分析或检测,样品的预处理,药物的控制性释放。等领域得到了广泛的应用,但是在食品领域相关的应用比较少。虽然MIPs在分析检测中应用较多,但具有工业上大量提取天然活性成分物质的MIPs鲜有报道,本实验利用非共价聚合法,以姜酮为模拟模板,采用不同溶剂制备球形分子印迹材料,并探讨应用M IPs工业化提取提取6-姜酚的可行性。 1 材料和方法 1.1 材料和试剂 姜酮、二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)、甲基丙烯酸(MAA)、偶氮二异丁睛(AIBN)、乙醚、乙腈均为分析纯;酒精(食用级)。 1.2 re-65a旋转蒸发器 Equinox55型傅立叶变换红外光谱仪Bruker公司;RE-52A旋转蒸发器;LC-20AT高效液相色谱仪日本岛津公司;Unicam UV500紫外可见光谱扫描仪Thermo Spectronic公司。 1.3 方法 1.3.1 标准曲线的绘制 采用紫外分光光度计对姜酮标准溶液进行全波长扫描,确定最大吸收波长为281nm。在281nm的条件下对不同质量浓度的姜酮标准溶液进行扫描测定,得到如下姜酮质量浓度和吸光度的标准曲线: 式中:y为姜酮溶液的质量浓度(μg/ml);x为姜酮溶液的吸光度。 1.3.2 mips的制备 以姜酮为模拟模板的MIPs的制备过程如下:按表1配料比,将0.2403g姜酮溶于12ml乙腈,待溶解后加入0.32ml MAA,在50℃条件下进行预组装12h后,再加入3.17ml EGDMA、适量的蒸馏水和单甘酯,最后加入0.0391g的AIBN和5ml致孔剂,用超声波除气20min,密封,在60℃恒温水浴中,引发聚合反应24h后,便可获得球形的MIPs,然后用食用酒精洗涤,直到洗脱液中检测不出姜酮(根据1.3.1节中公式),然后将颗粒放入干燥箱60℃烘干,备用。不含模拟模板分子的空白聚合物(NIPs),除不加入姜酮外,制备方法同上。 1.3.3 姜酚提取物的制备 取1.3.2节所制得的MIPs(2.56g)和NIPs(3.14g)分别装柱,然后分别用400g鲜姜汁上柱,分别用浓度10%、1 5%、2 0%、2 5%、3 0%、3 5%、4 0%、9 5%食用酒精洗脱被吸附的姜酚,然后将收集的洗脱液真空浓缩至适量,再用乙醚萃取3次,合并萃取溶液,挥去乙醚得到纯度较高的姜酚提取物。用乙腈定容后HPLC对样品检测。 1.3.46-姜酚的测定 色谱柱:Diamonsil C18柱;在波长281nm,使用HPLC,以姜酚肟作为内标,用水(A)和乙腈(B)为流动相,梯度洗脱程序为:0min,55%A;8.00min,50%A;15 mi n,45%A;40m in,10%A;45 mi n,55%A,流速为1 m l/m i n,进样量为1 0μl。根据参考文献,计算出每部分中实际6-姜酚的含量,进而计算出每个洗脱部分所获得6-姜酚占总洗脱量的质量百分数。 2 结果与分析 2.1 水和单甘酯的作用 从图1A可以看出,最终产物为分层的乳状液,没有生成MIPs。在非共价印迹聚合过程中,一般不采用水。因为水的极性大,既是氢键的提供者,也是氢键的受体,因此少量的水就会破坏印迹过程中形成的氢键,另外,水溶性交联剂在水溶液中的刚性差,形成的印迹材料寿命短,重复利用性差。因此一般不用水作为溶剂。图1B中,在没有水和单甘酯存在条件下,得到结块的MIPs,在其应用过程中需要进行研磨,难以研磨成均一球形产品而且过程耗时费力,不适于工业化生产。合成图1C MIPs时,虽然也与图1A用了相同的水作为溶剂,但由于加入了0.0275g(1‰,m/m)单甘酯,大大减小了体系中各种试剂的表面张力,形成了均匀分布的水包油微球,引发剂引发反应时,容易形成大量的球状MIPs。从图1C可以看出,球形大小肉眼可辨(颗粒直径约为0.1cm),基本均匀一致,可以直接应用于工业化提取分离6