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山螺药材中紫丁香苷的薄层鉴别及含量测定 山海市的山海市。ethook是桔梗科多年生蕨类植物的一种又名土党参和四叶参的植物。以根入药, 性味甘、辛, 平。具有消肿、解毒、排脓、祛痰、催乳的功效。笔者对其化学成分进行了系统研究, 在此研究的基础上, 本文拟建立山海螺的薄层鉴别方法以及紫丁香苷的含量测定方法, 以期为山海螺药材的真伪鉴别及质量控制提供一定的参考依据。 1 ms、1h-nmr和13c-nmr的光谱鉴定结构 岛津LC-2010A型高效液相色谱仪;岛津UV-2501型紫外分光光度计。紫丁香苷对照品为本实验室自制, 经IR、MS、1H-NMR和13C-NMR光谱鉴定结构, HPLC测定质量分数在98.5%以上, 可供含量测定用。硅胶G (青岛海洋化工厂) , 水为重蒸水, 其他试剂均为分析纯。 6批山海螺药材分别收集自吉林、辽宁等地, 来源见表1, 经笔者鉴定为桔梗科党参属植物山海螺Codonopsis lanceolataBenth. et Hook.的干燥根。 2 紫丁香苷的薄层鉴别 取样品粉末5 g, 加水150 mL。加热回流30 min, 滤过, 滤液浓缩至2 mL, 上样大孔吸附树脂, 以水洗脱, 弃去洗脱液, 再用30%乙醇洗脱, 收集洗脱液, 蒸干, 残渣加甲醇定容至1 mL, 作为供试品溶液。取紫丁香苷对照品, 加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液, 作为对照品溶液。按照2010年版中国药典一部附录ⅥB薄层色谱法试验, 吸取上述溶液各10 μL, 分别点于同一硅胶G薄层板上, 以三氯甲烷-甲醇-水 (15∶4∶0.2) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷以10%硫酸-乙醇溶液, 105℃加热至斑点显色清晰。样品色谱中, 在与对照品色谱相应位置显相同颜色的斑点。见图1。 3 重量测定 3.1 对照品储备液的制备 精密称取紫丁香苷对照品, 置10 mL容量瓶中, 用甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 配成浓度为0.826 mg/mL的对照品储备液, 备用。 3.2 滤过滤滤膜制备 取山海螺药材, 干燥后粉碎, 过40目筛, 精密称取药材粉末2 g, 精密称定, 加水100 mL, 加热回流2次 (1 h、30 min) , 合并提取液, 蒸干, 残渣加甲醇溶解并定容至25 mL, 0.45 μm微孔滤膜滤过, 取续滤液, 即得。 3.3 色谱柱及线性关系 Agilent C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm) 色谱柱;甲醇-水 (20∶80) 为流动相;检测波长:265 nm;流速:0.8 mL/min;柱温:35 ℃;进样量:10 μL。理论塔板数按紫丁香苷计算应不低于2 000。色谱图见图2。 3.4 紫丁香苷线性关系的测定 精密吸取对照品储备液1 mL, 加甲醇定容至10 mL, 分别精密吸取上述溶液2.0、5.0、10.0、15.0、20.0 μL, 注入高效液相色谱仪中, 以进样量 (X) 为横坐标, 峰面积 (Y) 为纵坐标, 计算回归方程:Y=1.25×106X+2.14×104,r=0.9997, 表明紫丁香苷在0.1652～1.652 μg范围内有较好的线性关系。 3.5 精密度测试 精密吸取对照品溶液10 μL, 连续进样6次, 按“3.3”项下色谱条件进行测定, 结果RSD为0.67%, 表明仪器精密度良好。 3.6 紫丁香苷的测定 取同一批样品粉末, 按照“3.2”项下方法平行制备6份供试品溶液, 按“3.3”项下色谱条件进行测定紫丁香苷的含量, 结果紫丁香苷的平均含量为0.81 mg/g, RSD为1.17%, 表明重现性良好。 3.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10 μL, 分别于0、2、4、6、8、10、20 h进样测定峰面积, 结果RSD为0.48%, 表明供试品在20 h内稳定性良好。 3.8 加样回收及加样回收试验 精密称取已知含量的同一供试品1 g, 共5份, 分别精密加入等量紫丁香苷对照品, 按照“3.2”项下方法制备供试品溶液, 依法测定含量, 结果平均加样回收率为102.98%, RSD为1.2%。 3.9 样品测定 按照上述含量测定方法, 对6批山海螺药材进行含量测定, 结果见表1。 4 提取溶剂的确定 4.1在山海螺的薄层色谱鉴别中, 曾采用甲醇、80%甲醇、乙醇、80%乙醇、水加热回流提取的方法制备供试品溶液, 最终选择水为提取溶剂, 大孔树脂处理的方法, 得到结果较好的提取液。 4.2在紫丁香苷的含量测定中, 分别考察了不同的提取方法, 流动相比例, 最终确定水为提取溶剂, 甲醇-水 (20∶80) 为流动相。最后的测定结果显示, 不同产地山海螺药材中紫丁香苷的含量差别较大。