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rp-hplc同时测定山西地产海红果中芦丁、金丝桃苷、槲皮素和山酚的含量 海红果是蔷薇科苹果属的一种杏仁果实。在我国主要分布在晋、陕、蒙3省(区)交界处,如山西保德、河曲、偏关等地,属于山西地产品种,当地民间食用海红果可以健胃消食、增强食欲、软化血管,常作为山楂的代用品入药。为阐明海红果的药用价值,本课题组对其进行了较为系统的研究,药理学实验表明,海红果提取物具有明显保护心脑血管的作用,其主要活性成分为黄酮类化合物。 为进一步科学评价山西地产海红果的药用价值并达到控制其质量,本实验对其中的4种主要黄酮类成分芦丁、金丝桃苷、槲皮素和山柰酚进行了含量测定。 1 药品、试剂与仪器 LC-10ATvp液相色谱仪,SPD-10Avp检测器(日本岛津公司); UV-260紫外-可见分光光度计(日本岛津公司);N2000色谱工作站(浙江大学智达信息工程有限公司)。 芦丁(0080-9705)、金丝桃苷(1521-200202)、槲皮素(10081-9905)对照品均购自中国药品生物制品检定所,山柰酚对照品(Sigma公司);甲醇为色谱纯;水为重蒸水;其余试剂均为分析纯; 海红果采自山西保德、河曲、偏关、兴县等地,经山西医科大学生药学教研室高建平教授鉴定为蔷薇科植物楸子M.prunifolia的果实。 2 方法和结果 2.1 柱温bg,nm -甲醇(A), 0.2%磷酸水溶液(B),流速1.0 mL·min-1;梯度洗脱0~7 min,55%~40% B;7~14 min,40% B;14~15 min,40%~25% B;15~25 min,25% B。柱温25 ℃;检测波长360 nm;进样量20 μL。在此色谱条件下待测组分可达到基线分离,见图1。 2.2 对照溶液的制备 分别精密称取芦丁、金丝桃苷、槲皮素和山柰酚对照品适量,加甲醇配制成质量浓度分别为24,96,50,12 mg·L-1的对照品溶液。 2.3 供试品溶液制备 取干燥至恒重的海红果粉末(60目)约1 g,精密称定,置于50 mL具塞三角瓶中,精密加入25 mL甲醇,称重,冷浸1 h后,超声提取40 min,放冷,补足失重,摇匀,0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液,作为供试品溶液。 2.4 对照品溶液的制备 精密称取芦丁、金丝桃苷、槲皮素和山柰酚对照品适量,用甲醇制成混合对照品储备液,芦丁(93 mg·L-1)、金丝桃苷(320 mg·L-1)、槲皮素(167 mg·L-1)、山柰酚(40 mg·L-1),再以甲醇稀释配制系列对照品溶液,在2.1色谱条件下,分别进样20 μL,记录色谱峰面积,以峰面积(Y)为纵坐标,质量浓度(X)为横坐标,进行线性回归,各组分的回归方程及相关系数,见表1。4种成分在相应浓度范围内线性关系良好。 2.5 色谱峰面积测定 取混合对照品溶液,按上述色谱条件,连续进样6次,每次20 μL,记录色谱峰面积。芦丁、金丝桃苷、槲皮素、山柰酚RSD分别为1.2%,1.6%,0.82%,1.8%。 2.6 溶液稳定性试验 取供试品溶液,分别于配制后0,2,4,8,12,24,48 h进样20 μL,记录峰面积,结果芦丁、金丝桃苷、槲皮素、山柰酚RSD分别为1.7%,1.3%,1.9%,2.1%,表明供试品溶液在48 h内稳定。 2.7 各组分含量的srd测定 精密称取同一批海红果样品粉末6份,各1.0 g,照供试品溶液制备方法制备供试品溶液,测定芦丁、金丝桃苷、槲皮素和山柰酚的含量,计算各组分含量的RSD分别2.6%,1.5%,2.3%,1.6%。 2.8 加样回收率试验 精密称取6份已知含量的海红果样品0.5 g,分别精密加入芦丁、金丝桃苷、槲皮素和山柰酚对照品适量,制备高、中、低3种浓度的供试品溶液,测定并计算加样回收率,结果见表2。 2.9 样品测定 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μL,注入液相色谱仪,照上述色谱条件分析测定,计算海红果中各组分的含量,结果见表3。 3 讨论 3.1 提取方法提取时间和提取效率提取效率 分别考察了不同极性的提取溶剂(不同浓度的甲醇、乙醇)和不同的提取方法(超声、回流),并对提取时间进行了优化,结果发现采用甲醇超声提取40 min,4种成分均达到较高的提取效率。 3.2 检测波长的选择 由芦丁、金丝桃苷、槲皮素和山柰酚对照品溶液紫外光谱可发现,以上4种物质均在360 nm附近有最大吸收,故选择测定波长为360 nm。 3.3 洗脱溶剂的选择 曾尝试采用甲醇-水、甲醇-醋酸水溶液、乙腈-醋酸水溶液等系统进行等度洗脱,但在短时间范围内难以达到4种组分完全分离,最终选用甲醇-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱,可使4种成分完全分离。 3.4 根据测量结果 海红果样品中,金丝桃苷含量最高,山柰酚含量较低。其中山西保德产海红