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中药治疗黄褐斑实验小鼠模型的建立方法 黄褐斑是一种可见的色素沉着性疾病。现实表现为面部皮肤或阳光下皮肤上有不规则的棕褐色斑点。本病通常发生在中年女性身上。一些男性也容易出现这种疾病，病史持续时间短，严重影响了患者的外在美好观念和身心健康，并影响其心理和生活。 黄褐斑的病因复杂,真正发病原因现在尚不清楚,主要致病因素有:激素失调、紫外线照射、情绪变化、遗传因素和药物影响等。由于黄褐斑发病机制的不明确,目前尚没有疗效确切的针对性药物。因此建立更为系统、科学的动物模型,对中药新药的开发尤为重要。目前关于黄褐斑小鼠模型建立的研究国内外均有报道,但仍处于探索阶段,尚无公认的造模方法。本文将近几年报道的关于黄褐斑小鼠模型造模方法的研究进行归纳总结,在此基础上结合黄褐斑在临床上最常见的证候分型之——肝郁型,为尝试寻求建立更为系统、科学的体现中医肝郁证的黄褐斑小鼠模型做一综述。 一、 实验结果及分析 一般认为,目前影响黄褐斑形成的主要因素,可以归纳为以下两部分:一是内在因素(激素或内分泌);二是外在因素(阳光照射、化妆品等)。根据以上理论,目前小鼠黄褐斑实验动物模型的主要建立方法有: 1.黄体酮全身攻击法:国内学者过伟峰等根据黄褐斑的发生与内分泌紊乱有关以及目前通行的“雌激素和黄体酮增多进而刺激黑素细胞而致色素沉着”的发病学假说,用黄体酮攻击雌性小鼠,使其内分泌紊乱来建立黄褐斑小鼠模型。分别以人临床剂量2倍、8倍黄体酮注射液注射于小鼠大腿根部1个月,以皮肤、肝脏组织中酪氨酸、丙二醛(MDA)含量变化及皮肤黑色素细胞病理形态学指标作为考察模型是否成功的依据。结果显示,黄体酮高剂量组皮肤、肝脏酪氨酸含量与正常组比较差异具有统计学意义(P0.01),其中肝脏酪氨酸含量与黄体酮低剂量比较差异具有统计学意义(P0.05);两剂量组的肝脏MDA含量及高剂量组的皮肤MDA含量明显升高,与正常组比较差异具有统计学意义(P0.01),从而得出本方法建立的动物模型符合临床黄褐斑患者生化指标的改变特征;鼠抗人单克隆抗体HMB45(melanoma黑素瘤)标记黑色素细胞的病理图像学分析结果显示,模型组表皮黑色素阳性目标的各项指标和正常组相比较,差异具有统计学意义(P0.01)。以上结果初步显示,本方法建立的黄褐斑小鼠模型获得成功。此后许多学者用本方法成功复制出了黄褐斑小鼠模型。 2.紫外线照射法:有文献报道,中波段的紫外线(UVB)能显著引起黑色素的产生和沉积,Imokawa等应用中波紫外线照射对黑色素增多性皮肤病动物模型做了较详细的研究,并运用中波紫外线造模的方法观察了酪氨酸酶抑制剂对黑色素细胞数量和含量的影响,证实了采用紫外线照射用于黑素增多性皮肤病动物模型研究的可行性。国内学者潘扬等通过对相关文献的分析,发现过度日光照射是发生黄褐斑的重要因素,长期中波紫外线(波长320～275 nm)照射可使黑色素细胞增殖,并提高黑色素细胞的活性。其根据这一诱发假说,通过中波紫外线(波长320 nm)照射雌性纯白豚鼠1个月,拟通过紫外线照射使黑色素细胞增殖及增加黑色素细胞酪氨酸的量来建立黄褐斑实验动物模型。以皮肤黑色素细胞病理形态学指标及皮肤和肝脏组织酪氨酸、超氧化物歧化酶(SOD)、MDA含量变化作为考察模型是否成功的依据。结果显示,模型组与正常组相比较,皮肤和肝脏组织酪氨酸、MDA含量显著升高(P0.01),SOD活性显著降低(P0.01);用HMB45为第一抗体,以Elivision TMplus免疫组化方法显示表皮中的黑色素颗粒阳性目标,经计算机进行图像的定量分析,阳性目标的各项指标(目标面积除外)和正常组相比较,差异有统计学意义(P0.01),因此认为用紫外线照射攻击雌性豚鼠可用于复制黄褐斑动物实验模型。李英姿等将此方法运用到小鼠动物模型的建立上,以波长为320 nm的中波紫外线(UVB)每日照射小鼠1次,照射时间60 min,连续照射并观察小鼠脱毛部位的变化情况。结果显示,小鼠皮肤经过紫外线的照射后,模型组小鼠皮肤中的SOD活性和MDA含量与空白组相比较,差异有统计学意义(P0.01),其中SOD活性显著下降,MDA含量显著升高;小鼠皮肤组织形态学观察显示,模型组小鼠表皮层中的角化层增厚,表皮基底细胞层黑色素细胞增多。其用此方法成功复制了黄褐斑小鼠模型,并探讨了黑龙江省中医药管理局2006年立项课题——二花鲜汁膜治疗黄褐斑的实验研究。姜醒等用本方法复制黄褐斑小鼠模型,将小鼠放在SS-03P型光疗仪灯具正下方的20 cm处,紫外线剂量设定为120 μW·cm-2,照射时间为20 min·d-1,连续照射8周。结果显示,与空白组相比较,模型组的皮肤和血清中的SOD活性显著降低,MDA含量显著升高(P0.01)。以上结果初步显示,该方法可成功的复制黄褐斑小鼠模型。 二