法罗培南钠片在健康人体的药代动力学研究.docxVIP

法罗培南钠片在健康人体的药代动力学研究 法罗培南是一种丙烯类抗生素，主要以口服钠的形式应用于临床疾病。除抗铜绿假单胞菌活性较弱以外,对需氧及厌氧革兰阳性菌、革兰阴性菌均显示出广谱的抗菌活性。研究表明,法罗培南对各种β-内酰胺酶稳定,较少产生耐药性,现已用于治疗敏感菌引起的呼吸系统、泌尿系统等各系统感染,且取得良好的疗效。本试验采用HPLC-UV法测定血浆及尿液中法罗培南浓度,研究健康受试者口服三剂量(150 mg、300 mg和600 mg)法罗培南钠片后法罗培南在体内的药代动力学特征,为临床制定合理的给药方案提供参考依据。 1 法罗培南钠片 Agilent 1100系列高效液相色谱仪(配有自动进样器和紫外检测器);GL-20G-Ⅱ高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂);XW-80A旋涡混合器(上海精科实业有限公司);高速离心机(美国雅培公司)。 法罗培南钠片剂,规格:150 mg/片(以法罗培南计),批号由北京四环制药有限公司生产。法罗培南钠标准品(法罗培南含量87.5%)由东北制药集团公司沈阳第一制药厂提供。替硝唑由中国药品生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯,三氯乙酸、磷酸二氢钾、氢氧化钠等其他试剂均为分析纯。空白血浆由中国医科大学附属盛京医院输血科提供。 2 方法和结果 2.1 平均体重及一般情况 经医学伦理委员会批准试验方案后,选择12名健康受试者(男6名,女6名),平均年龄为(26.1±1.1)岁,平均体重为(61.3±10.9)kg。试验前,受试者均接受体检,血尿常规、肝肾功能和心电图检查等均正常。试验前规定时间内及试验期间未服用其他任何药物,禁烟酒。告知受试者试验的内容、可能出现的不良反应及享有的权利,自愿签署知情同意书。 2.2 分组、给药、血浆 将12名受试者随机分为3组,分别口服法罗培南钠片150、300和600mg。给药前1 d受试者晚食清淡饮食后禁食,试验日早晨空腹口服给药,200 m L温开水送服,并于给药后2 h内禁水,给药后4、10 h统一进标准餐。 于服药前(0 h)和服药后0.33、0.67、1、1.5、2、2.5、3、4、5、6、8、10 h,分别采集受试者静脉血4 m L,离心分离所得的血浆,于-70℃冷冻保存待测。受试者于用药前排空膀胱,收集0 h空白尿样和0~2、2~4、4~8、8~12 h的尿样,测定总体积后,留取10 m L尿样于-70℃保存待测。 2.3 样品测定 2.3.1 流动相、检测波长 色谱柱:Agilent ZORBAX E-clipse Plus C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:乙腈:0.05 mol/L KH2PO4缓冲液(磷酸调节p H值为3.2)=16∶84(v/v);流速:1.0 m L/min;检测波长:318 nm;柱温:30℃。 2.3.2 低温离心时间 血样:于具塞塑料试管中添加500μL血浆,补加50μL水,加入50μL内标(6μg/m L替硝唑水溶液),加300μL 10%三氯乙酸涡旋混合1 min,4℃10 000 r/min低温离心10 min。取上清液300μL,加入1 mol/L Na OH45μL,涡旋混合2 s,10 000 r/min离心2 min,进样100μL。 尿样:于具塞塑料试管中精确添加尿样200μL,补加20μL水、15μL 10%三氯乙酸涡旋混合2 s,10 000 r/min离心1 min,进样50μL。 浓度超过标准曲线范围的血样和尿样用空白血浆或尿液稀释后,按上述方法复测。 2.3.3 标准曲线及定量限 血样标准曲线的制备:将不同浓度的法罗培南标准系列水溶液加入500μL的空白血浆中,配制相当于0.025、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/m L的血浆样品,按血样处理方法操作,制备标准曲线。采用最小二乘法,以法罗培南与内标的峰面积比(As/Ai)对浓度C进行回归计算,回归方程:As/Ai=0.801 2 C+0.006 0,R=0.999 2。最低定量限为0.025μg/m L,线性范围为0.025~10.0μg/m L。 尿样标准曲线的制备:将不同浓度的法罗培南标准系列水溶液加入200μL空白尿液中,配制0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/m L的尿液样品,按尿样处理方法操作,制备标准曲线。以法罗培南的峰面积对浓度C做回归,回归方程:As=58.50 C-0.484 2,R=0.999 1。最低定量限为0.1μg/m L。线性范围为0.1~10.0μg/m L。 2.3.4 保留时间和典型色谱图 血样中的法罗培南和内标替硝唑的分离度良好,无内源性物质干扰,保留时间分别为8.1、5.9 min。典型色谱图见图1