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corrole光动力治疗的重原子效应 光动态治疗（pdt）是一种光学疗法，通过光谱仪破坏和吸收光敏剂后对肿瘤组织进行治疗。在pdt过程中（图1），光敏剂使用光能将三相氧（3三十二年）转化为单链氧（1二氧化硫），导致细胞氧化损伤，最终导致细胞死亡或坏死。首次获得美国医疗管理局批准用于临床应用的pdt药物是血卟啉通过氧化处理获得的混合混合物。 近20年来, 多吡咯大环化合物如卟啉和酞菁等一直是第二代PDT药物研发的重点. Corrole是一类由4个吡咯通过3个亚甲基相连形成的具有18-π电子共轭结构的大环化合物, 结构上与卟啉很相似(图2). 由于近年来在合成方面的一些突破性进展, Corrole大环很快成了卟啉化学的研究热点. 虽然已有文献提及Corrole在PDT方面具有潜在应用前景, 并且已发现Corrole可以抑制癌细胞的生长和转移, 但对Corrole的PDT研究仍然有待开展. 最近, 我们合成了一系列Corrole衍生物, 经过鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma, NPC)细胞的体外PDT试验后, 筛选出了一个具有优良PDT活性的Corrole光敏剂1(图2). 本文报道该类Corrole光敏剂在PDT中的重原子效应. 1 实验部分 1.1 氧化-五氟苯基-二吡咯烷烃 Corrole衍生物1和2按文献的方法利用5-(五氟苯基)-二吡咯烷烃与相应的羟基苯甲醛在酸性条件下缩合,再经由DDQ氧化得到,产率均在8%左右. 1.2 体外光细胞毒性和暗细胞毒性的mtt法分析模型 Corrole光敏剂对NPC(HONE-1)的体外光细胞毒性(Photocytotoxicity)和暗细胞毒性(Dark cytotoxicity)采用MTT法进行分析. 2 光敏剂的pdt活性 华南地区是NPC疾病的高发区, 故我们选用了人类NPC(HONE-1)细胞株作为Corrole光敏剂的PDT研究对象. Corrole衍生物1和2是非水溶性的, 使用时须先配制其DMSO溶液, 再依浓度要求用微量注射器吸取相应量的药液转移到NPC细胞培养皿中(1×104cells/well). 当Corrole光敏剂1和2的浓度达到2 μmol/L时, 它们对NPC的暗细胞毒性均小于15%, 即对NPC没有显著的暗细胞毒性. 图3是Corrole光敏剂1和2对NPC的光细胞毒性随光敏剂浓度的变化情况. 实验中使用的光源是300 W的卤光灯, 并经过隔热和允许波长大于515 nm的光通过的滤光片进行过滤. 光细胞毒性在细胞用PDT处理后24 h进行测定. 实验结果显示, 当Corrole光敏剂1的浓度为0.5 μmol/L时, 其光细胞毒性已经达到约90%. 说明Corrole衍生物1对NPC具有良好的PDT活性. 共聚焦荧光显微镜方法分析结果显示, Corrole光敏剂1被NPC细胞吸收后主要分布在线粒体上, 利用该光敏剂进行PDT后NPC细胞是通过凋亡的途径被破坏的. 在PDT过程中单线激发态的光敏剂要经由系统间交互作用(Intersystem Crossing, ISC)转变成三线激发态后才能将能量传递给氧分子(图1). 而分子从单线到三线激发态之间的电子跃迁是自旋禁阻的. 分子不同自旋多重态之间的跃迁效率可以通过旋-轨偶合作用来提高. 要增强旋-轨偶合可以给分子连接上一个重原子(内重原子效应), 或者将分子置于含重原子的环境中(外重原子效应). Gorman等证明利用重原子效应可以使氮桥联二吡咯光敏剂的PDT效率提高1 000倍. 为了探索重原子效应对Corrole光敏剂PDT效果的影响, 我们合成了光敏剂2(图2). 分子2除周边带羟基的苯环上取代了两个碘重原子外, 其分子结构与光敏剂1完全相同. 光敏剂1和2在二氯甲烷中的紫外-可见光谱吸收峰位置和摩尔消光系数均很接近, 薄层色谱也显示两者的极性也非常接近. NPC细胞对它们的吸收程度应该是相近的. 然而, 光敏剂2对NPC细胞的PDT活性急剧下降, 在2 μmol/L浓度范围内几乎没有明显的PDT活性(图3). 这可能是由于光敏剂2在PDT中产生单线态氧的能力因碘的重原子效应下降所致. 荧光光谱显示, 光敏剂1在650 nm处有很强的荧光峰(图4), 而光敏剂2的荧光光量子产率则大幅度减弱. 可见, 虽然光敏剂2的S1-T1ISC增强了, 但从PDT结果看其单线态氧的量子产率反而下降了. 卟啉类PDT光敏剂吡咯环的氮原子被硒取代后也观察到类似现象. 这可能是由于重原子效应缩短了光敏剂三线激发态的寿命所引起的. 已报道的研究结果表明, 多卤代卟啉光敏剂卤素取代的位置和数量可以影响其在有机溶剂中单线态氧的量子产率. 在光敏剂1的基础上, 目前我们正在合成各种不同结构的单卤代和多卤代C