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环境因子对链状亚历山大藻生长特性的影响 亚历山大海岸是一种危害海洋麻痹性的恶红藻，也是中国东南沿海最重要的有毒红藻之一。近年来,东海长江口邻近海域春季常常发生大规模链状亚历山大藻赤潮。贝类摄食有毒链状亚历山大藻,通过消化、吸收,使毒素在其体内蓄积。一般情况下,PSP毒素对贝类本身无害,而人类食用了这些有毒贝类就可能出现肢体麻痹、头痛、眩晕、恶心等中毒症状,严重的可能导致死亡。PSP的毒性非常高,比氰化物高出20倍,它是一种神经毒素,可以阻塞神经细胞膜上的钠离子通道,导致神经脉冲传导停止,而且PSP毒素相对稳定,贝类经过烹饪也不能完全去除该毒素。1986年,中国台湾地区居民食用含赤潮毒素的贝类紫蛤,造成30人中毒,2人死亡。据不完全统计,自20世纪60年代以来,在我国由毒藻造成的贝毒污染共造成过600多人中毒,30人死亡。截至目前,全球沿海地区都有麻痹性贝类中毒致死事件的报道。 由于PSP中毒事件在我国频繁发生,亚历山大藻赤潮对沿海居民身体健康、水产养殖业发展和海洋生态安全等构成了严重的威胁。我国政府和学术界开始逐渐重视这类毒素的调查研究,许多学者相继投身到这个研究领域中来。同时,对PSP毒素利用价值的研究也引起越来越多的关注。近几年,对塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense)的研究越来越深入,而对链状亚历山大藻的研究较少。已有资料显示,在同种藻类的不同藻株间,生长特性及毒素成分等方面存在一定差异。不同的环境条件对同一藻株的生长和产毒也有不同的影响。 本文以人工培养的链状亚历山大藻为研究对象,设计了一个四因素三水平的正交实验,研究温度、盐度、光照强度和起始氮磷含量等因素对其生长特性的影响,确定链状亚历山大藻生长的适宜条件,提供不同环境条件对链状亚历山大藻生长影响的数据,为有毒链状亚历山大藻赤潮的预报和PSP毒素标准品的制备打下基础。 1 材料和方法 1.1 藻细胞计数 本研究所使用的产毒藻为链状亚历山大藻,由暨南大学提供。将盐卤过滤后加自来水配制成不同盐度的培养液,所用的培养基为f/2培养基,经高温高压(121℃,20min)灭菌,待冷却后接种,于不同的条件下培养,定期以血球记数器进行藻细胞计数。每周分植一次,以获得生长力旺盛的藻细胞。 1.2 藻细胞培养方法 参考文献,设计了以下正交实验因素水平表(表1)。实验共设9个组合(表2),每个组合设两个平行实验,采用一次性培养,在开始正式实验之前,藻细胞先在各自实验条件下适应一段时间。培养容器为2 000mL三角烧瓶。每隔2天取5mL培养液进行藻细胞计数,绘制生长曲线,实验结果用SPSS 11.0版生物统计分析软件进行分析。 1.3 细胞比增长率的计算 细胞比生长率用以下公式计算: 式中,Nt为t1时的细胞密度,N0为t0时的细胞密度。每个条件下的比生长率为生长指数期的比增长率平均值。 2 结果与分析 2.1 不同培养条件对藻细胞生长和细胞密度的影响 温度、盐度、营养盐和光照在不同培养条件组合下对链状亚历山大藻细胞的生长有明显的影响。如图1所示,链状亚历山大藻最大的藻细胞密度值出现在4号实验(光照强度10 000lx,温度20℃,盐度30及起始氮磷含量2 649∶108μmol/L,3X)中,当培养到第25天时藻细胞最大密度达到2.03×104cell/mL。3号实验(光照强度5 000lx,温度30℃,盐度35及起始氮磷含量2 649∶108μmol/L,3X)、6号实验(光照强度10 000lx,温度30℃,盐度25及起始氮磷含量1 766∶72μmol/L,2X)、9号实验(光照强度15 000lx,温度30℃,盐度30及起始氮磷含量883∶36μmol/L,1X)条件下藻细胞不能良好生长,分别在第20天、第14天、第14天全部死亡,表明高温不利于藻细胞的生长。细胞比增长率与最终细胞密度呈曲线关系:y=0.057 1nx-0.501 9(R2=0.991 4)(图2)。细胞比增长率与最大细胞密度亦呈曲线关系:y=0.048 31nx-0.427 3(R2=0.969 7)(图2)。 除高温度实验组(30℃)藻细胞全部死亡外,链状亚历山大藻在不同培养条件下,藻细胞的对数生长期各不同。如1号实验对数生长期为第6~第24天;2号实验对数生长期为第6~第16天;4号实验对数生长期为第8~第14天;5号实验对数生长期为第4~第24天;7号实验对数生长期为第4~第10天;8号实验对数生长期为第5~第17天。 2.2 密度和光照度对细胞生长的影响 如图3所示,随光照度的增加,细胞比增长率和细胞最大密度随之降低。光照度5 000lx时,细胞比增长率为0.020 954,细胞最大密度为13 611cell/mL;光照度10 000lx时,细胞比增长率为-0.00 944,细