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中国海域腹泻性贝毒的研究现状 腹泻性核毒症（sd）是由有毒红藻和原甲藻中毒引起的脂肪多环聚醚类生物活性物质。它可以丰富食物中的其他过滤动物，并危害食用者的健康。腹泻性贝毒在全球沿岸海域均有分布,是世界范围内具有严重威胁的赤潮藻毒素之一。 腹泻性贝毒DSP在我国存在比较普遍,近年来每年均有发现腹泻性贝毒的报道,危害有不断加重的趋势。近年对我国沿海部分海域贝类毒素分布调查显示,在渤海湾、胶州湾、莱州湾、秦皇岛、广东沿海和福建等海域均发现了DSP。迄今为止我国已有多种贝类污染腹泻性贝毒。 传统上腹泻性毒素主要包括三大类:酸性的大田软海绵酸(okadaic acid,OA)和它的衍生物鳍藻毒素(dinophysistoxins,DTXs);中性的扇贝毒素(pectenotoxins,PTX1-10);含双硫酸基的虾夷扇贝毒素(yessotoxins,YTXs)。由于YTXs,PTXs在贝中通常与OA和DTXs同时检出,尽管在结构和毒性作用机理上与OA和DTXs等存在差异,但一直以来也被归为腹泻性贝类毒素。最近几年随着研究的不断深入,许多研究者认为继续将YTXs和PTXs归为腹泻性贝毒组分是不合适的,如YTXs既不能引起腹泻,也不能抑制蛋白磷酸酶2A的活性,却对人的肝脏、心脏、神经系统有损伤。2004年3月FAO/IOC/WHO在都柏林举行的关于贝类生物毒素会议上,重新按化学结构将贝类生物毒素分为8组,包括azaspiracid,brevetoxin,cyclic imines,domoic acid,okadaic acid,pectenotoxin,saxitoxin和yessotoxin,YTXs,PTXs等毒素从腹泻性贝毒中分出来分别成为专门的一类毒素。 YTX是含有2个磺酰基的多环聚醚类化合物(图1),1986年首次从采自日本陆奥(Mutsu)湾的虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)的消化腺中分离得到,之后在世界上许多国家和地区的贝类和藻类中都检测到了YTXs。到目前为止已有近100种YTX同系物从浮游植物和贝类中被发现[12,13,14,15,16,17],但是只有大约40种YTXs的结构通过核磁共振(NMR)和/或液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)等技术和方法得以确定。目前已报道能产生YTXs的藻类有3种:网状原角藻(Protoceratium reticulatum)、多边舌甲藻(Lingulodinium polyedrum)和具刺膝沟藻(Gonyaulax spinifera)。图2和表1中列举了目前世界上在贝类和藻类中检测到YTXs的国家和地区。 腹泻性贝毒及其贝体内与其共存的YTXs,PTXs,GYM等毒素是对人类健康具有极大潜在威胁的海洋生物毒素,因而对生态环境及水产养殖业形成严重的威胁。我国对以上毒素的研究比较滞后,只有一些使用小鼠生物法检测的报道以及几篇液相衍生荧光检测贝类样品的报道。在我国贝类中已发现的腹泻性贝毒成分仅有软海绵酸OA和鳍藻毒素DTX-1,这可能是不够重视,研究得比较少,另外标准物质的匮乏也限制了对以上毒素的研究。为了了解我国贝类中存在的腹泻性贝毒及其他毒素成分,我们采用高效液相色谱-串联质谱仪(HPLC-MS/MS)方法对我国海产贝类中的贝毒组分进行分析。 2 材料和方法 2.1 样品检测和分析方法 贝类样品来自国家专项“九○八”———赤潮、海洋病原生物和外来生物入侵灾害调查与研究(908-01-ZH3)课题在全国沿海采集的贝类样品。从常规小鼠生物法呈DSP毒素阳性的样品中挑选了12个毒性最大的样品,对这些样品进行HPLC-MS/MS分析,采样站位和贝类种类见表2。样品的处理过程如下:将贝样去壳匀浆,取2 g匀浆加入8 mL萃取液(80%的甲醇与水的体积分比数)超声10 min,离心,将上清用0.45μm PTFE一次性针管滤器过滤后用于HPLC-MS/MS分析。 2.2 检测条件及方法 小鼠生物法(mouse bioassay,MBA)参照中华人民共和国进出口商品检验行业标准《出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法》,SN0294。操作过程简述如下:取120 g贝肉匀浆,加入360 mL丙酮,超声10 min,离心取丙酮上清液。丙酮溶液经真空低温浓缩,蒸去丙酮,之后加入少量水,用乙醚萃取两次,合并有机相。低温真空蒸去乙醚,用含1%吐温60的生理盐水定容6 mL(20 g贝肉与1 mL 0.5%吐温60的生理盐水之比),配成高浓度注射液。必要时可将原液稀释4倍或16倍的低浓度来计算毒性。取贝毒提取物原液或经稀释后的注射液1及0.5 mL,根据腹腔注射法注射到昆明种小鼠(18~20 g)体内,每组剂量处理3只,观察24 h,求出每组3只死亡2只以上的最小剂量,计算毒性大小