可溶性全长hPPARγ重组蛋白的制备及其活性研究的中期报告.docxVIP

可溶性全长hPPARγ重组蛋白的制备及其活性研究的中期报告 一、研究背景和意义 全长PPARγ（Peroxisome proliferator-activated receptor gamma）是核受体家族中的一种，参与调控许多生理过程，包括脂肪代谢、血糖稳态、免疫反应等等。其激动剂核苷酸类药物如诺维和非诺维，以及苯甲酸类药物如罗格列酮等广泛应用于糖尿病、高脂血症、动脉硬化等代谢性疾病的治疗中。因此，对全长PPARγ的研究具有重要意义。 然而，全长PPARγ是一种膜内蛋白，其表达和提取非常困难。目前，常用的制备全长PPARγ的方法包括从人体组织获得、转化菌株表达等，这些方法都存在一定的局限性。 因此，近年来出现了一种新型的制备全长PPARγ的方法——利用带有表达标签的重组蛋白在大肠杆菌等常用细胞中表达和提取，这种方法具有高表达量、纯化简便等优点。本研究即采用这种方法制备和研究可溶性全长hPPARγ重组蛋白。 二、研究进展 1.构建重组表达载体 将全长hPPARγ编码序列克隆至表达载体pET-30a(+)中，加入六肽标签His-Tag。通过PCR检测验证成功构建了该重组表达载体。 2.表达和纯化重组蛋白 表达重组蛋白使用大肠杆菌BL21（DE3）转化菌株，诱导表达后采用Ni-NTA亲和层析纯化His-Tag结构域。通过SDS检测表明，目标蛋白已被纯化。 3.鉴定重组蛋白的活性 采用荧