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不同时间窗电针对局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损及脑梗死体积的影响 半矮脑缺血带不是静态的，而是动态的。急性脑梗塞的主要治疗目标是抢救可逆性缺血半暗带。研究表明, 在众多因素中, 治疗时机的选择也是影响半暗带有效保护的关键因素之一。超过一定的时间界限, 缺血损害则变为不可逆, 此时无论采取任何治疗手段都收效甚微。因此, 在治疗上出现时间窗概念。Pulsinelli首先提出治疗时间窗, 认为在脑缺血发作后, 一定时间内给予积极治疗, 可减轻脑损伤的程度、促进机能恢复、改善长期的预后, 这个允许的时间称为治疗时间窗。针刺治疗缺血性脑卒中临床取得比较满意的疗效, 但关于针刺治疗时机选择目前的研究结果尚不一致, 基于此, 本实验以线拴法复制右侧大脑中动脉阻塞大鼠模型, 以大鼠神经功能缺损评分及脑梗死体积为观察指标, 探讨不同时机给予电针的疗效, 分析治疗最佳时机, 为临床提供实验数据。 1 材料和方法 1.1 鱼scxk 清洁级雄性 Wistar大鼠60只, 体重300±20g, 5月龄, 由黑龙江中医药大学实验动物中心提供, 动物合格证号:SCXK黑2008-004。随机分为5组, 即3h针刺组、6h针刺组、12h针刺组、1d针刺组、3d针刺组, 每组各12只。 1.2 脑缺血模型 使用线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉复制局灶性脑缺血模型, 术后大鼠出现左侧偏瘫, 提尾悬拉时出现左上肢蜷缩屈曲或被动性过度伸展, 同时出现向左侧转圈、跌倒, 即可纳入实验。 1.3 百会穴前顶穴 3h针刺组、6h针刺组、12h针刺组、1d针刺组、3d针刺组大鼠分别在术后3、6、12小时及1天、3天时开始头针治疗, 针刺选穴取百会、曲鬓、前顶。大鼠百会穴位于顶骨正中, 曲鬓穴定位在右眶外缘与右外耳门连线的后2/3, 前顶穴定位在两侧眶外缘连线与顶正中线交点。大鼠头部常规剪毛消毒, 用0.35mm×25mm毫针在百会穴处快速刺入皮下并向右下方达曲鬓穴, 另取一针在百会向前平行刺入达前顶穴, 连接KDW808Ⅱ电疗仪, 百会透曲鬓接正极, 百会透前顶接负极, 电针频率7Hz, 强度6mA, 时间30min。针刺每间隔12h进行1次。各组均针刺7天, 第7天针刺后进行神经功能缺损评分, 然后处死动物取脑进行TTC染色。 1.4 指标报告 1.4.1 大鼠的活动特点 0分:大鼠无任何不对称活动;1分:提起尾巴时左前爪不能完全伸展;2分:在1分的基础上左前肢活动障碍;3分:左前肢紧贴胸壁;4分:大鼠自由活动时向左侧转弯;5分:伴有明显的前爪后推动作;6分:只能围绕原点旋转;7分:完全不能支撑身体重量, 只能躺向左侧。 1.4.2 冠状切色染色 各组大鼠在规定时间内被断头处死, 冰皿上快速取出大脑, 弃去嗅球、小脑和低位脑干, 冠状切成4片, 每片厚约3mm, 放于2%的TTC溶液中进行染色。经TTC溶液染色的脑片在37℃孵箱中孵育30min, 梗死区呈白色, 正常组织呈红色, 将染色后的脑组织浸泡在4%多聚甲醛溶液中固定2h, 用于脑梗死体积测定, 计算脑梗死体积百分比。 1.5 处理数据 数据以均值±标准差表示, 统计分析采用SPSS11.5软件做t检验, 以P0.05为有统计学意义。 2 脑梗塞体积检测 电针治疗7天后, 各组均有大鼠死亡。神经功能缺损评分检测结果表明, 3h针刺组、6h针刺组、12h针刺组、1d针刺组四组之间无显著性差异, 3d针刺组神经功能缺损评分与以上四组比较有显著性差异, 提示24h以内电针治疗对急性局灶性脑缺血大鼠能明显改善其神经功能缺损症状。脑梗死体积检测结果表明, 3h针刺组与6h针刺组两组间统计无显著性差异, 12h针刺组大鼠脑梗塞体积与3h、6h针刺组比较,P0.05, 1d和3d针刺组脑梗塞体积与3h、6h针刺组比较,P0.01, 提示6h以内头针治疗能显著减小局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积。结果见表1。 3 神经功能缺损评分及脑梗死体积变化 针刺疗法在缺血性脑卒中康复期应用已经比较普遍, 但由于应用的时间不同, 临床疗效差异较大。在临床治疗中发现, 针刺的临床疗效可受多种因素的影响, 其中中风病针刺治疗时机的选择, 是影响中风病针刺临床疗效的一个非常重要的因素, 因而探讨中风病针刺治疗时机的研究具有重要意义。目前有学者提出针刺治疗脑缺血应“超早期”介入, 但仍需深入研究。 本实验是在确认针刺百会透曲鬓、百会透前顶对局灶性脑缺血模型大鼠具有保护作用的前提下, 以神经功能缺损评分及脑梗死体积为观察指标, 初步探讨了不同时间窗电针的治疗作用。结果提示, 大鼠造模后, 无论是从3h、6h、12h, 还是从1d、3d开始给予电针刺激, 都能有效改善模型大鼠的神经功能缺损评分, 促进其神经功能的恢复。由于3d针刺组神经功能缺损评分与3h针刺组、