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福州市2004年登革热疫情及病原学特征分析 登吉热是世界上亚热带和亚热带地区重要的蚊子传播疾病。近年来，全球登吉热疫情逐渐活跃。一些东南亚国家，如菲律宾、马来西亚和缅甸，根据气候原因每年都有登吉热疫情报告。同时，它也给邻国控制了登吉热的输入带来了挑战。福建省登革热最早报道于1873年厦门岛的暴发,另有记载福州市于1944年有一次暴发,此后50多年未见报道;1999年夏秋季在福州市近郊发生局部暴发,流行毒株为2型病毒,推测为境外输入传播。从2004年9月上旬起,在福州市区及所辖连江、闽候县等地均发现登革热病例,现将该起疫情流行病学及病原学特征分析如下。 病毒rna的提取、鉴定和测序 现场处置登革热疫情所掌握的个案调查情况、登革热住院临床病例,结合中国疾病预防控制信息系统所提供的人口资料和直报的福建省2004年登革热病例个案情况,采用描述流行病学方法分析其临床和流行病学特点及影响因素等。 现场处置登革热疫情调查的外环境白纹伊蚊孳生地状况,用布雷图指数表示。 诊断标准参照中华人民共和国卫生行业标准WS 216-2001:登革热诊断标准及处理原则。ELISA检测登革热特异性IgM、IgG,试剂盒购自澳大利亚PanBio公司。 参照文献方法,采用C6/36传代细胞(广东省疾病预防控制中心赠)从早期登革患者血清标本分离,病毒分离株用登革热型特异性单克隆抗体(中山医科大学产品)为二抗的间接免疫荧光试验鉴定。 采集感染者急性期血清分析。按QIAamp Viral RNA Mini Kit试剂盒说明提取病毒RNA,140μl血清病毒RNA提取物,悬于50μl洗脱液中(含60 U Rnasin);取10μl悬液为病毒RNA模板,用通用引物D1、D2(引物浓度为0.5μmol/L,MgCl2浓度1.5 mmol/L)进行一步法RT-PCR反应。反应程序为:50℃35 min,95℃15 min,94℃30 s,55℃30 s,72℃90 s,共35个循环;72℃10 min。将反应产物100倍稀释后,取3.0μl加入第二轮PCR反应混合液中(引物与MgCl2浓度同第一轮),各份产物分别使用通用引物D1和型特异性引物D3～D6配对,进行第二轮扩增。反应程序为:94℃5 min,94℃30 s,55℃30 s,72℃60 s,共30个循环;72℃5 min。试剂来源:病毒RNA提取试剂盒、One Step RT-PCR试剂盒、胶回收试剂盒均购至QIAGEN公司,Rnasin购至TaKaRa公司,引物设计见参照文献,引物由TaKaRa公司合成(表1)。 PCR产物测序和比对,将PCR扩增产物经QIAquick Gel Extraction Kit试剂盒纯化回收后,通过D1、D2引物进行正、反向测序,测序试剂盒购至ABI公司,测序由ABI 310测序仪完成。正、反序列经互补配对验证后,拼接成完整扩增片段序列,利用Blast软件将所测序列与GenBank数据库进行比对,进一步判定型别并初步分析同源性。 福州市登革热个案分析 福州市登革热的流行从2004年9月上旬至10月下旬止,按照诊断标准,福州市区及其郊区县共报告发现登革热患者93例,多为轻症病例,主要集中在福州市台江区。 对93例登革热个案分析表明,出现发热症状者达93.14%,头痛58.82%,肌肉关节痛56.86%,颜面潮红52.94%,出疹52.94%,出血37.25%;有79例患者做过血常规,其中白细胞下降者(4.0×109/L)占89.87%,血小板下降者(100×109/L)占54.93%,两者皆下降者54.93%。 2. 血清标本和igg 为核实疫情,以指针病例家周围50 m范围内的居民采血样,用ELISA法测定登革热特异性IgM、IgG。台江区疫点共采集了血清标本89份,IgM阳性7份,IgG阳性12份,单阳性12份,双阳性6份;闽侯疫点共采集血清标本62份,IgM阳性3份,IgG阳性2份,单阳性3份,双阳性2份;连江疫点共采集血清标本80份,IgM阳性5份,IgG阳性3份,单阳性5份,双阳性1份。 (2) 时间分布及人群特征 ①地区分布:病例分布在福州市的3个县区6个乡镇街道,其中台江区71例(发病率227.71/10万),闽侯县6例(发病率9.79/10万),连江县16例(发病率17.12/10万)。县区之间在地理位置上不毗邻,但同一个县区的街道、乡镇则是毗邻的。 ②时间分布:台江区最早发现病例是9月8日,发现指针病例9月21日,无新病例发生10月15日,疫情蔓延37天;连江县最早发现病例是9月12日,发现指针病例10月4日,无新病例发生10月19日,疫情蔓延22天;闽侯县最早是9月16日,发现指针病例9月24日,无新病例发生10月8日,疫情蔓延22天;9月上旬1例,中旬2例,下旬2