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货号:QS3111 规格：50管/48样 木质素过氧化物酶（Linin peroxidase, Lip）试剂盒说明书 紫外分光光度法 测定意义： 木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，属于木质素降解 酶系，在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方 面具有较大的应用潜力。 测定原理： 木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛，在310nm处有特征吸收峰。 自备实验用品及仪器： 天平、研钵、低温离心机、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿。 试剂组成和配制： 试剂一：液体80mLX 1瓶，4°C保存。 试剂二：液体10mLX 1瓶，4C避光保存。 试剂三：液体5mLX 1瓶，4C保存。 酶液提取： 组织：按照质量（g）：试剂一体积（mL）为1： 5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL试 剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于4C，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。 细胞：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000： 1的比例（建议500万细 胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）； 然后4C，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。 培养液或其它液体：直接检测。 测定操作： 测定管 试剂一（mL） 0.6 试剂二（mL） 0.2 样品（mL） 0.1 试剂三（mL） 0.1 充分混匀，于1mL石英比色皿，蒸馏水调零，测定310nm处10s 和310s吸光值，记为A1和A2，AA=A2- A1 酶活计算公式： 按照蛋白浓度计算 酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。 , AA 一 、 . LiP 活性（nmol/min /mg prot） = XV 反总—（V 样XCpr）—T= 215XAA — Cpr ￡ x d 按照样本质量计算 酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。 LiP 活性（nmol/min /g 鲜重）二 ~^A XV 反总：（V 样XW：V 样总）：T= 215XAA^W ex d 按照细胞数量计算 酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化Inmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。 一.. AA … LiP活性（nmol/min /104 cell） = XV反总：（V样X细胞数量：V样总）：T ex d =215XAA^细胞数量 按照液体体积计算 酶活性定义：每毫升培养液每分钟氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。 AA LiP 活性（nmol/min /mL） = XV 反总：V 样：T= 215XAA ex d e：藜芦醛摩尔消光系数：9300L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； V反总：反应总体积，1mL； V样：反应中样本体积，0.1mL； V样总：加入提取液体积，1mL； Cpr:样本蛋白浓度，mg/mL； W：样本质量，g； T：反应时间，5min