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中华绒螯蟹生精小管生殖细胞发育不同步研究 近年来，随着人工育苗技术的成熟和育种规模的迅速扩大，对中国的环腺炎进行了全面研究。对其生殖生物学研究主要集中在:生殖系统的形态学和组织结构,雄性生殖系统的组织学,并对雄性生殖细胞进行了分期,针对性早熟开展的卵巢组织切片观察等。而对河蟹精巢发育组织等特征、精巢整体生精小管精子成熟方式和具体的精巢发育周期的划分,迄今未见系统报道。该方面的研究将为河蟹的生殖生物学提供基础资料,为河蟹的人工繁殖和养殖提供基础资料。 1 材料和方法 1.1 材料表面 河蟹体重10～100 g,于2004年3月27日～2004年10月1日,分3次购自白洋淀。 1.2 巢外部形态解剖 河蟹外部形态 解剖前,称重河蟹,测量其体长、体宽,并观察体色,前螯绒毛特征情况。 精巢外部形态 解剖后,观察精巢颜色、位置、形态等特征,称重精巢。 生殖腺指数(%)=精巢鲜重(g)/体重(g)×100 精巢组织学 活体解剖取精巢,用波恩氏液固定,酒精脱水,石蜡包埋,切片厚度为6～7 μm,H.E染色,olympus-II显微镜观察摄影。 2 结果 2.1 生精小管生长规律 精巢1对,玉白色,位于胃的侧后方和心脏两侧之前方。前端左右分离,而在胃的后方以一横桥相连接。 组织切片观察, 精巢由多数生精小管盘旋而成,外被一层结缔组织膜。生精小管之间是结缔组织的填充物。生精小管横切面大多近圆形,不同发育时期管腔直径和管壁厚度不同。小管一侧为生精上皮,另一侧为管壁上皮,二者均着生于近基膜处,基膜外侧即与结缔组织相联。生精小管中生殖细胞不断增殖形成生殖带。伴随精巢发育,生精上皮不断向管腔内分裂增殖,形成不同发育阶段的生殖带(图1:1)。管壁上皮细胞形状也随精巢发育阶段不同而发生变化:从精原细胞期的长柱状上皮细胞(核呈狭长椭圆形)变成精母细胞期的扁平状(核变扁平),最后变为精子期时的膜状上皮(核短线状或观察不到核)。 2.2 生殖细胞发育 2.2.1 不同发育阶段的生精小胞 生发区一侧产生精母细胞,不断增殖形成生殖带向管腔推移。生殖带横切面通常为椭圆形或不规则的多边形。在同一个生精小管的横切面上,具有不同发育阶段的生殖细胞(图1:2)。精原细胞最大,位于近基膜处,圆形或椭圆形;初级精母细胞略小于精原细胞,核圆形或椭圆形;次级精母细胞直径与初级精母细胞相近,核圆形;精细胞最小,核圆形。 2.2.2 输精小管方向组合 精巢发育中,前端顶部的生精小管首先成熟,随后沿着精巢外缘向末端输精小管方向推移,成熟的精子进入输精小管,释放后,生精小管内只留下一些空腔(图1:3)。这种成熟方式与生殖细胞在同一生精小管中的发育相似,都是由一侧向另一侧推进成熟。 2.3 共筑巢发育周期 依据河蟹精巢的外部形态、组织结构及生精小管内占优势的生殖细胞等特点,可以将精巢发育周期分为以下几个时期: 2.3.1 皮细胞的形态 河蟹体重约10～20 g,体长约20～32 mm,体宽约20～36 mm。精巢乳白色,精巢重量5 mg(鲜重),约1 mm,生殖腺指数0.02%。生精小管细小密集,外围结缔组织较多(图2:1、2),管壁上皮细胞较大呈柱状,排列不规则,核细长或椭圆形。管腔内精原细胞占绝大部分,细胞核近圆形,在各期细胞中最大,异染色质多团块状,贴核膜分布或随机分布(图2:3、4)。 2.3.2 精巢发育迅速,生精小管生长迅速 河蟹体重约13～40 g,体长约28～40 mm,体宽约30～45 mm,精巢重5～60 mg,生殖腺指数0.015%～0.15%。精巢发育迅速,生精小管增多,直径增大,管壁上皮细胞变细长,核变细长,管腔内初级或次级精母细胞占优势,该期生殖带最多,同一生精小管内出现多种生殖带(图2:5)。次级精母细胞初级精母细胞精原细胞,染色质聚集于核的四周或一侧,呈空心圆形或弯月状(图2:6),次级精母细胞核浓缩成圆形或不规则形,染色后呈均匀的深蓝紫色(图2:7)。当发育至次级精母细胞后期时,小管直径明显增大,几乎达到精细胞期水平。 2.3.3 生精小管分布的分布 河蟹体重约30～70 g,体长约35～65 mm,体宽约35～65 mm,精巢膨大呈乳白色,重50～300 mg,比精母细胞期明显增大,生殖腺指数约为0.15%～0.28%,生精小管直径约为发育初期的2～4倍。管壁上皮细胞形状近膜状,上皮细胞核有的被挤成短线状;有的已不见细胞核,只有膜状上皮。生发区精原细胞生殖带呈弯月状位于生精上皮内侧,生精小管内精细胞占绝大部分。由于染色质进一步浓缩,精细胞核变小,近圆形,直径约为次级精母细胞核的1/2～1/3,染色均匀,核呈蓝紫色,细胞质被染成浅粉色(图2:8)。 2.3.4 生殖带和脏器 河蟹体重约50～100 g,精巢特征与精细胞后期相近,膨大呈乳白色,生殖腺指数约为0