基于氧化石墨烯-硫堇膜的葡萄糖生物传感器.docx

基于氧化石墨烯-硫堇膜的葡萄糖生物传感器 糖尿病是心血管肿瘤和其他“健康杀手”的第三位“健康杀手”。临床上最显著的成就是血糖显著增加。血液中葡萄糖的正确、快速、灵活的检测非常重要。现在，检测血糖浓度的方法主要包括基于显色法的光学方法、酶生物传感器法和损伤检测技术。电酶生物传感器的生物传统武段具有快速、灵敏的优点，在糖尿病的诊断中显示了诱导的未来。 纳米技术的飞速发展为纳米粒子在生物传感器和生物分析方面开辟了新的方向. 氧化石墨烯和纳米金颗粒由于具有比表面积大、 吸附能力强, 已经在生物传感领域得到了广泛应用. 本研究结合石墨烯的表面特性, 将具有π-π效应的硫堇固定在石墨烯表面, 然后将纳米金和葡萄糖氧化酶固定在电极表面, 制得一种高灵敏的电流型葡萄糖生物传感器. 1 实验部分 1.1 仪器、设备和材料 CHI 604D/CHI 630D电化学工作站 (上海辰华仪器公司); pH计和CP214电子天平 (上海奥豪斯仪器有限公司); KQ-218超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司); HC-2064高速离心机 (上海天美);氧化石墨烯(来自实验室制备); 氯金酸(国药); 葡萄糖氧化酶 (GOD, 国药). 不同pH的醋酸缓冲溶液(ABS)是通过0.2 mol·L-1HAC和0.2 mol·L-1NaAC配制备而成. 1.2 mn纳米金溶胶的制备 在99mL蒸馏水中加入1mL HAuCl4(质量分数为1%), 加热至沸腾. 然后加入2.5mL柠檬酸三钠 (质量分数为1%), 继续加热, 溶液颜色由灰黄色变成深红色, 继续加热15min(或加热至锥形瓶溶液变为100mL), 然后冷却至室温, 即得到16nm纳米金溶胶. 1.3 生物传感器的制备 玻碳电极(直径2mm)经1.0和0.3μm的A12O3抛光后, 用二次蒸馏水清洗两次, 然后将其置于H2SO4(V) ∶H2O2(V) = 3 ∶7的混合溶液浸泡10min, 取出冲洗, 再依次用丙酮、 乙醇、 二次水中超声清洗各5min. 首先制备了化石墨烯(GO)-硫堇(Th)纳米复合物. 将1mg石墨烯加入1mL蒸馏水中, 充分搅拌, 然后将1mL 1mmol的硫堇加入其中, 在室温下搅拌48h之后离心, 即得GO-Th纳米复合物, 然后将其悬浮在1mL去离子水中, 制得氧化石墨烯、 硫堇悬浮液. 在处理好的电极上滴上3μL 0.1mmol·L-1的GO-TH溶液, 室温放置1h, 清洗, 将其置于金溶胶中, 于冰箱中保存12h, 取出, 清洗, 将其置于5.0mg·mL-1GOD溶液中, 于冰箱保存过夜, 制得生物传感器GOD/ nano-Au/GO-Th/GCE. 电极组装过程见图1. 1.4 工作电极修饰 采用三电极检测装置: 饱和甘汞电极为参比电极, 铂丝电极为对电极, 修饰电极为工作电极. 在室温条件下, 于5 mL 0.1 mol·L-1ABS(pH 5.5)中进行循环伏安和计时电流测试, 记录该传感器对葡萄糖的安培响应. 2 结果与讨论 2.1 葡萄糖氧化酶在电极的固定 采用循环伏安法和电化学交流阻抗方法对电极自组装过程的电化学特性进行了研究. 由图2看出, 裸玻碳电极(曲线a)在pH 5.5 ABS溶液中没有出现氧化还原峰. 当玻碳电极表面修饰上一层GO-Th后, 电极出现了一对可逆的氧化和还原峰(曲线b), 这主要是由于固定在氧化石墨烯上的硫堇, 作为一种优良的电子媒介体, 具有很好的氧化还原特性. 随着纳米金颗粒在GO-Th膜上的组装后, 其氧化还原峰电流下降 (曲线 c), 这可能是金溶胶的固定加大了电极的厚度, 从而减缓了电子传递. 特别是当葡萄糖氧化酶固定在纳米金表面后, 其氧化峰和还原峰再次降低(曲线 d). 交流阻抗谱图能进一步证明葡萄糖氧化酶在电极表面的固定(图3). 曲线a为裸玻碳电极的交流阻抗图谱, 其探针分子非常容易到达电极的表面发生反应, 即电极上不存在阻碍电子传递的物质. 当GO-Th修饰到电极表面后, 交流阻抗图谱曲线b相对于曲线a有直径减小的趋势, 表明在电极上已成功修饰了GO-Th. 由于硫堇作为电子媒介体, 具有良好的电子传递能力. 当电极吸附nano-Au后, 交流阻抗图谱在高频区出现明显的半圆形(曲线c), 阻抗值达约166Ω, 表明nano-Au被固定到了电极表面. 阻抗的增加可能是由于金纳米颗粒带负电荷, 对负离子 [Fe(CN)6]3-基团有排斥作用. 最后当GOD固定在电极表面后, 半圆直径进一步增大(曲线d), 阻抗值达约2430Ω, 这是因为葡萄糖氧化酶是生物大分子, 不利于电子的传递. 这些结果表明葡萄糖氧化酶能够通过层层自组装的方法将其固定在电极的表面. 2.2 扫描速度的影响 图4(a)是该葡萄糖生物传感器