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光生物反应器培养鞭金藻溶解氧和ph值的研究 汉江等鞭金藻属于金藻门、等鞭藻和等鞭金藻。具有个体小、无细胞壁、游动缓慢,且富含高度不饱和脂肪酸等特点,在水产经济动物苗种生产中被广泛应用,主要作为双壳贝类幼体、虾蟹类的蚤状幼体、海参等的优良饵料,可以显著提高种苗的成活率和变态率。 目前,我国微藻饵料培养基本上是采用人工室内水泥池培养,培养后藻细胞浓度仅能达到6×105~3×107cell/mL,饵料培养水体配备为育苗水体的30 %~60 %。此外,由于天气、操作技术等因素的影响,常常出现饵料老化、污染、藻细胞浓度过低等现象。光生物反应器具有较高的光能利用率,能实现微藻的高藻细胞浓度培养,全封闭不易污染等。笔者研究使用的气升式光生物反应器具有结构简单、制造成本低,占地面积小、培养条件易人工控制等优点,使其在微藻的高藻细胞浓度大规模培养方面具有很强的应用发展前景。 Heath等研究指出,微藻养殖中溶解氧是个敏感而可靠的参数,该参数可用于评估微藻的生长状况和藻细胞活性。利用封闭式光生物反应器进行湛江等鞭金藻的高藻细胞浓度培养,实施溶氧和pH值的实时监控,一方面可以掌握微藻生长状况,避免藻体老化;另一方面可以及时调整微藻培养的生态环境,使微藻在最佳条件下快速生长。这种指标监控比普遍使用的测定干重、藻细胞浓度、叶绿素含量等更为灵敏和迅速。 通过研究气升式光生物反应器对湛江等鞭金藻培养过程中溶氧及pH值的变化,旨在为光生物反应器高效培养海洋微藻提供一定的参考依据。 1 材料和方法 1.1 应器材料组成 光生物反应器由大连汇新钛设备开发有限公司研制生产,采用3种不同体积的柱式光生物反应器:种子规模80 L,生产规模350 L和900 L。反应器材料由耐热透光尼龙膜制成,以不锈钢圆柱网固定成竖直筒状。80 L光反应器内径25 cm、高165 cm;350 L光反应器内径60 cm、高180 cm;900 L光反应器为12个75 L反应柱串联而成,每个反应柱内径23 cm、高180 cm。反应器上方有一进出水孔、接种管口,底部有取样和收获管。底部安置控制装置,包括充气控制装置、温度控制器、定时器。反应器四周安置可拆卸式照明灯管,可以进行人工控光(图1)。 1.2 光催化氧化能力的测定 试验用微藻藻种取自汇新海洋科技发展有限公司,将微藻细胞接入5 000 mL的三角烧瓶中,于光照培养箱(MODEL SPX-250-G)中培养,光照强度为(2 500±100)lx,光周期为18 L∶6 D,温度20~25 ℃。将处于指数增长期的藻种,以体积比1∶5(藻种∶海水)分别接种于3种型号的反应器中,一次性培养,培养液温度控制在(24±0.6)℃。自然光照射,气升式循环,每天定时补充CO2。 当微藻培养至藻细胞浓度为500×104cell/mL、700×104cell/mL和900×104cell/mL时,对培养液进行溶氧和pH值的日变化研究。试验进行过程日照充足,试验前1 h停止充CO2。采用搅拌器混匀藻液,试验时间为7∶00—19∶00,每隔2 h取样测定其pH值和溶解氧。取样时以反应器圆柱中心部位为取样点,每次取3个样,采样时用照度计采取四点法测定光反应器不同位置(东面、西面、南面、北面,取样方向为南)光照强度取其平均值,当日早7∶00—11∶00为光照度逐渐增加时段,晚19∶后光照度极微弱。试验过程中测定反应器内藻液温度以及微藻生物量。 1.3 藻液ph值变化测 微藻生物量测定 利用血球计数板在显微镜(OLYMPUS-CX21型光学显微镜)下计数,测3次取平均数,单位为1.0×104cell/mL。 溶氧及pH值变化 水中溶解氧采用碘量法和溶氧仪相结合测定,利用pH计监测藻液pH值。 试验于2006年4—6月在大连汇新钛设备开发公司微藻试验基地进行。 2 结果与分析 2.13 光生物反应器培养微藻的溶氧行为 研究3种规格光反应器培养湛江等鞭金藻至(500~900)×104cell/mL时,藻液中溶氧的日变化(图2、图3、图4)。 80 L光反应器中,3种藻细胞浓度金藻的溶氧均随着光照度的升高而增加。当平均光照度为6 000 lx以上时(9∶00—13∶00),500×104cell/mL和700×104cell/mL的2组溶解氧基本维持在13.0 mg/L左右,未见有明显的增高现象;以后随着光照度的减弱,藻液溶解氧急速下降;但900×104cell/mL金藻组却出现7∶—15∶溶氧持续升高,在下午15∶(光照度2 630 lx)时达到溶氧最高值19.8 mg/L的现象。此现象说明,就内径25 cm的柱式反应器而言,平均光照度6 000 lx以上(13∶00,8 800 lx)对于藻细胞浓度700×104cell/mL以下金藻的光合放氧作用没有明显促进作