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刺梨不同干燥方法对sod活力测定的影响 超氧化物诱导酶（sod）是一种富含金属离子的生物活性物质。2-iih-iih-o2反应。通过超氧化物阳离子自由基（o2-）快速转移到过氧化氢（b2-）和分子氧气。在随后的反应中，二甲基化合物在过氧化氢酶（cat）、各种氧化酶（如apx）和抗坏死酸1谷膀胱的配合物中转化为水和分子氧。这是国际学术界公认的抗癌活性酶类。 有资料表明,刺梨中Vc含量和SOD酶活性较高,目前对SOD活性多采用邻苯三酚自氧化法.但现有文献报道刺梨中SOD活力相差甚远(高的达1000U低的仅为50U).因此,采用邻苯三酚自氧化法对刺梨样品中SOD活性进行测定时,我们考虑Vc是否对SOD测定产生影响予以清除.我们根据Vc和SOD分子大小的差异(Vc分子量为176,而SOD分子量在30000～50000之间),采用在低温条件下透析的方法除去Vc同时用碘量法监测透析液中Vc含量,以保证有效的除去Vc.最后测定了通过不同干燥方法得到的刺梨样品的SOD酶活力,初步探讨了刺梨提取物的保存方法,为进一步研究提供理论依据. 材料和方法 1 主要材料和设备 1.2 透析袋dmes 冷冻干燥机(FD-1型,北京博医康实验仪器有限公司);真空干燥箱(DZF-6050型,上海一恒科技有限公司);电子天平(AL104,Mettler-Toledo Group);透析袋(DC800,截留分子量10000～12000);紫外分光光度计(TU—1901型,北京普析).试剂均为分析纯,自制双蒸水. 2 方法 2.1 刺梨样品的制备 选取去枝叶后的鲜刺梨1kg,洗净、晾干、榨汁,5000r/min离心5min后得到汁600ml.按质量比的0.2%加入苯甲酸钠,4℃冷藏保存. 取4份刺梨汁每份100ml,按以下条件制备刺梨样品(A、B、C、D): A、加入保鲜剂,冷冻干燥15h得到22.7g产品; B、未加保鲜剂,冷冻干燥15h得到13.2g产品; C、加入保鲜剂,在鼓风干燥箱30℃条件下干燥10h,真空30℃条件下干燥10h后,称重得到橘黄色固体22.5g,密封后放置冰箱过夜,冷冻干燥4h后,收集产品; D、未加保鲜剂,在鼓风干燥箱30℃条件下干燥10h,真空30℃条件下干燥10h后,称重得到橘黄色固体14g,密封后放置冰箱过夜,冷冻干燥4h后,收集产品. 将制得的样品分为两份.一份直接测其SOD活力,另一份置于真空干燥器中保存一个月后测定. 2.2 试验溶液的制备 邻苯三酚自氧化法测定试液参照文献;碘量法试液参照05版药典. 2.3 vc含量的测量 采用碘量法滴定. 2.3.2 vc含量的测定 取A样品3份,每份1g,用7mL水稀释后,装入透析袋,分别置于盛有150mL4℃双蒸水的烧杯中透析,2h换一次水,取50mL透析液3份,滴定,计算Vc含量.其结果见(图1). 从图1可以看出,经24h的透析基本上可将刺梨样品中的Vc除去. 2.4 asod活性的测定 由图2可见,邻苯三酚的自氧化反应体系在319nm波长下有最大吸光度值,且只有一个单峰,因此,我们选定在319nm波长下做光度测量,测定SOD活力. 邻苯三酚自氧化速率△A325·min-1应控制在0.075左右,因此选择邻苯三酚溶液加入量为8μL. 取4.5mlTris-HCl(V)缓冲液加入试管,25℃预热20min后,加入经25℃预热10min后的刺梨样液10μ和邻苯三酚8μl,迅速混匀并计时,倒入比色皿中,在319nm波长下,自反应30s开始每隔1min测定1次吸光度值,测3min,计算平均每分钟吸光度值的增量,记作ASOD. SOD活力定义:在1ml反应液中,每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率达50%的酶量定义为一个活力单位(U) 酶活力(U)=[(A0-ASOD)/A0]/50%×反应液总体积×(稀释倍数/样液体积) 其结果见下图3 2.4.4 不同保鲜剂对刺梨提取物活力的影响 取刺梨样品A 1g,用7mL(V1)双蒸水溶解,按以上方法透析24小时,结束后记录液体的体积为V2,计算稀释倍数.分别测定一个月前和一个月后刺梨样品A、B、C、D中SOD的活力见下表2. 由表中可以看出,加入保鲜剂的刺梨冻干粉中的SOD活力最大,失活率最小,由此可见,冷冻干燥的确是保存刺梨提取物的有效方法. 3 邻苯三酚自氧化法 本实验测得刺梨冻干粉中SOD最大活力为142.1U·mL-1,Vc含量为18.02mg·mL-1,说明刺梨中SOD和Vc含量都很高,同时未经过透析的样A 1g直接稀释1-7倍进行SOD测定结果从900 U·mL-1下降到400U·mL-1,而经过透析后的样品A 1g其SOD测定值为142.1 U·mL-1,说明刺梨果中富含的Vc抑制了邻苯三酚的自氧化作用.因此,采用邻苯三酚自氧化法测定SOD