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山楂叶提取物中总黄酮的含量测定 山楂中含有多种黄酮类化合物。近年来的许多研究表明，山楂对心血管系统有降压、冠状动脉粥样硬化、心肌供血和氧气的影响。高血压、高血糖、冠状动脉粥样硬化和心绞痛的症状呈良好疗效。它们是控制血管疾病的天然植物资源。山楂总黄酮是其重要的有效成分。根据分析，它主要是牡荆素鼠李糖苷、单羟丙酮鼠李糖苷、金丝桃苷和山楂酸。 有研究报道,以芦丁为对照品,以NaNO2-AI(NO3)3-NaOH为显色剂,于500 nm附近测定山楂总黄酮含量,方法专属性不强,有局限性,准确性较差;因此,本文采用NaNO2-AI(NO3)3-NaOH 和A1C13两种常用的比色法,以芦丁为对照,用分光光度法法测定山楂叶提取物中总黄酮的含量,探讨其优缺点。 1 材料和机器 1.1 亚硝酸钠、硝酸盐类试剂 芦丁对照品(中国药品生物制品检验所,批号 100080-200707);山楂叶提取物(山东临沂爱康药业有限公司,批号AKH081201);亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、氯化铝、乙醇、甲醇等试剂均为分析纯;水为蒸馏水。 1.2 仪器、设备与防治 UV-2450紫外分光光度计(日本岛津公司);KH-250DB 型数控超声波清洗器(昆山禾创市超声仪器有限公司);JA2003N电子天平(上海精密科学仪器有限公司);XS105分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);DKS-24型电热恒温水浴锅(上海经济区沈荡中新电器厂);DGG-9053A型电热恒温鼓风干燥箱(上海森信试验仪器有限公司)。 2 方法和结果 2.1 纳米2-aino33-naoh显色系统 2.1.1 对照溶液的制备 取芦丁对照品约25mg,精密称定,置100mL容量瓶中,用50%乙醇溶解并稀释至刻度,密塞,摇匀,即得对照品溶液。 2.1.2 供试品溶液制备 取山楂叶提取物约50mg,精密称定,置50mL容量瓶中,加入50%乙醇适量超声处理15min后,取出,放凉,用50%乙醇稀释至刻度,密塞,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。 2.1.3 扫描波长的确定 精密量取对照品溶液3mL和供试品溶液1mL,分别置25mL容量瓶中,各加水至6mL,加5%亚硝酸钠溶液1mL,摇匀,放置6min,加10%硝酸铝溶液1mL,摇匀,放置6min,加氢氧化钠试液10mL,再加水至刻度,密塞,摇匀,放置15min,以相应试剂为空白,分别在200～800nm波长范围内扫描,见图1、2。根据结果,选用510nm为检测波长。 2.1.4 标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液各1、2、3、4、5、6mL,分别置25mL容量瓶中,各加水至6mL,加5%亚硝酸钠溶液1mL,摇匀,放置6min,加10%硝酸铝溶液1mL,摇匀,放置6min,加氢氧化钠试液10mL,再加水至刻度,密塞,摇匀,放置15min,以相应的试剂为空白,在510nm处测定吸光度,以吸光度(A)为纵坐标,浓度(C)为横坐标,绘制标准曲线,结果得回归方程:A=0.0124C-0.0153,r=0.9997,表明芦丁在10.052～60.312μg/mL浓度范围内与吸光度呈良好线性关系。 2.1.5 仪器精密度试验 精密量取对照品溶液3mL,置25mL容量瓶中,照标准曲线制备项下方法,自“加水至6mL”起,依法测定吸光度,连续测定6次,计算RSD值,结果RSD值为0.46%,表明仪器精密度良好。 2.1.6 稳定性测定 精密量取供试品溶液1mL,分别置25mL容量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至6mL”起,依法加入相应试剂,当显色体系反应完全后,每间隔15min记录一次吸光度值,连续120min,计算RSD值,考察其稳定性。结果:RSD值为1.90%,表明供试品溶液在显色后120min内稳定性较好。 2.1.7 总黄酮含量测定 取山楂叶提取物约50mg,共6份,精密称定,分置50mL容量瓶中,加入50%乙醇适量,超声处理15min,取出,放凉,用50%乙醇稀释至刻度,密塞,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。精密量取供试品溶液各1mL,分别置25mL容量瓶中,照标准曲线制备项下方法,自“加水至6mL”起依法测定吸光度,计算山楂叶提取物总黄酮的含量。结果:山楂叶提取物中总黄酮平均含量为86.16%,RSD为1.00%,表明方法重复性好。 2.1.8 加标回收率和rsd 在已知总黄酮含量的山楂叶提取物中加入一定量芦丁对照品,按供试品配制项下的方法制备成供试品溶液;精密量取供试品溶液各1mL,分置25mL容量瓶中,照标准曲线制备项下方法,自“加水至6mL”起,依法测定吸光度。结果:9个样品的回收率在95.19%～103.81%范围内,平均回收率为99.30%,RSD值为2.80%,结果见表1。表明该方法测定的结果准确可靠。 2.1.9 供试品溶液