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微透析技术在药物靶组织分布和代谢研究中的应用 大多数药物应该从血液（或中央室）分布到目标组织，以发挥愈合作用。同时，它也可以随着药物化学结构的变化而改变，即药物的代谢过程。药物代谢不仅影响药物的血药浓度和代谢的产生，还影响药物的排泄过程。研究药物在靶组织中的分布和代谢,对于阐明药物体内过程、疗效和安全性有着极其重要的意义,并能为新药研发和临床合理用药提供科学依据。因此,选择一种好的技术研究药物靶组织分布和代谢显得尤为重要。微透析(Microdialysis,MD)技术作为一种操作简单、组织损伤小的在体研究技术,通过灌注埋植在各靶组织的微透析探针,可用于在线持续取样或灌注给药,研究药物靶组织分布和代谢。笔者通过查阅近几年相关文献,就MD技术及其在药物靶组织分布和代谢研究中的应用作一综述。 1 sd技术的总结 1.1 md探针的研究进展 1966年,Bito等首次报道了用半透膜对狗血液和脑细胞外液中的游离氨基酸和其他电解质进行采样。1972年,Delgado等使用一种自制的MD探针研究药物在猴脑内的分布和代谢,这是现代MD探针的雏形。1974年,Ungersted等首次建立了在体MD技术。到20世纪80年代中期,随着MD技术及各种分析检测手段的发展,MD技术已成为研究药动学的重要工具,同时,也广泛应用于研究药物在靶组织中的分布和代谢。利用MD技术可以快捷有效地对靶组织细胞外液(extracellular fluid,EC F)中游离药物及其代谢产物进行实时监测,且样品(透析液)无需预处理,可直接用于含量测定,具有“活体、微创、实时、高效”等特点。并且由于透析过程中物质跨膜扩散具有双向性,利用MD技术还可以将药物直接导入靶组织,研究药物的局部代谢情况。 1.2 探针植入的方法及流程 MD系统主要由探针、连接器、收集器、灌流液和微量注射泵组成。其中,探针是该系统中最关键的部分,其类型有同心圆探针(主要用于脑部)、柔性探针(主要用于血液)、线性探针(主要用于肌肉、皮肤、肿瘤、肝等外周组织)和分流探针(主要用于胆管等流体),见图1。探针的透析膜通常由纤维素、聚丙烯腈、聚乙烯砜或聚碳酸酯等材料制成,截留相对分子质量为5×103～5×104。实验中要根据靶组织的生理特点和研究要求,选择探针类型、直径和有效透析膜长,并按照待测化合物的理化性质,选择合适的透析膜,使微透析效率达到最佳。 探针植入不同靶组织有相应不同的操作方法,结合本实验室的研究,笔者以同心圆探针植入小脑进行脑微透析为例简单介绍,见图2。大鼠麻醉后固定于脑立体定位仪上,手术暴露颅骨并确定探针植入位置,然后插入探针底座,固定;待大鼠恢复一定时间后,再将探针经底座植入小脑靶部位,并且探针通过聚乙烯管与灌注泵相连进行灌流,收集透析液样品。其中探针植入靶组织位置、植入后平衡时间、灌流液温度、灌流液成分和灌流速度等都会不同程度地影响探针的提取效率,进而影响测定结果。探针的提取效率是指透析液中待测化合物的浓度与其在样品基质中浓度的关系。在实际应用中,常用相对回收率推断其探针的提取效率。相对回收率的估计有多种方法,常用的有外推至零流速法、零净流速法和反透析法等。 1.3 分析方法分类 在微透析实验中,由于透析液量少,需要灵敏度较高的分析方法来检测待测物质。目前常与MD技术联合应用的分析方法主要有2种:基于非分离的分析方法有放射免疫法(RIA)、在线生物感受器(on-line biosensors)等;基于分离的分析方法则可在线检测多种物质,包括最常用的高效液相色谱法(HPLC)、高效毛细管电泳法(HPCE)。检测器主要有紫外吸收(UV)、荧光检测(FLD)、激光诱导荧光(LIF)和质谱(MS)等。 2 在药物靶组织的分布研究中的应用 2.1 药物-蛋白结合指标 药物与蛋白结合是一种可逆过程,血浆中药物的游离型和结合型之间保持着动态平衡关系。但只有游离的药物才能透过血管壁向各靶组织转运分布,并在靶组织发挥药理作用,进而代谢和排泄。因此,测定血液中药物-蛋白结合参数是研究药物分布和代谢的一个重要前提,同时,由于MD技术所取样品只含游离药物,其在药物-蛋白结合参数研究中具有重要作用。Evrard等在大鼠一次性静脉注射氟比洛芬20mg·kg-1后,在6 h期间持续MD取样10次,每次250μL,研究氟比洛芬的药物-蛋白结合情况。结果,血浆中氟比洛芬的蛋白结合率为98.0%～99.5%,平衡时的结合参数为(0.194±0.162) mg·L-1,蛋白结合程度表现出浓度依赖性,说明MD技术可以很好地反映药物-蛋白结合情况,进而有效研究药物在靶组织的分布和代谢。 2.2 检测药物在髓剑膜的分布 药物向脑组织转运的分布研究是MD技术应用最多的领域,一方面MD技术最初开发目的就是用于神经化学领域的研究,另外早期