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马铃薯块茎中还原糖含量测定 由于品种不同，甘薯糖的还原糖含量差异很大，通常为0.04%2.0%。还原糖含量是决定马铃薯块茎是否适合加工的重要指标。油炸马铃薯薯片或薯条要求成金黄色, 但马铃薯块茎中较高的还原糖含量会使油炸马铃薯薯片或薯条颜色变为褐色, 甚至变为黑色, 严重影响其商业价值。马铃薯块茎中理想的还原糖含量约为鲜重的0.2%以内, 用于炸片的马铃薯块茎还原糖含量不应超过0.33%, 用于炸薯条的不应超过0.5%。在同一品种马铃薯块茎中, 还原糖含量会随着其储藏温度、储藏时间长短的不同而发生变化, 马铃薯块茎在10℃以下的低温储藏, 其还原糖含量会明显增加。因此, 马铃薯块茎中还原糖的测定, 对于评价马铃薯加工品质、保障加工产品质量具有重要的意义。 以前马铃薯中还原糖的测定主要采用国家标准GB 6194—86或砷钼酸比色法。经笔者多次试验, 马铃薯块茎中还原糖含量在0.5%以上时, 采用国家标准方法测定可以得到较为准确的结果;含量在0.2%~0.5%时, 用国家标准方法测得的结果误差较大;含量小于0.2%时, 用国家标准方法不能检出。用砷钼酸比色法可以测定马铃薯块茎中小于0.2%的还原糖含量, 但这种方法需多种试剂, 而且操作过程极为烦琐。本方法参考有关文献, 采用3, 5—二硝基水杨酸比色法测定马铃薯块茎中的还原糖含量。这种方法可测定马铃薯块茎中小于0.2%的低还原糖含量, 而且测定范围宽、准确度高, 重现性好, 操作简单、快速, 可以满足测定马铃薯块茎中还原糖含量的需要。 1 实验方法 1.1 仪器 飞利浦HR 2839型组织捣碎机;7230 G型可见分光光度计。 1.2 试剂 (1) 醋酸锌溶液 219 g/L水溶液。 (2) 亚铁氰化钾水溶液 106 g/L水溶液。 (3) 葡萄糖标准溶液 1.0 mg/ml, 配前葡萄糖于98~100℃烘箱中烘至恒重。 (4) 定容液的制备 6.5g 3, 5—二硝基水杨酸溶于少量水中, 移入1 000 ml容量瓶中, 加2 mol/L氢氧化钠溶液325 ml, 再加入45 g丙三醇, 摇匀, 定容。 1.3 测量步骤 (1) 提取破碎 样品洗干净, 擦干, 切碎, 称取100 g, 加100 ml水, 在组织捣碎机中捣碎, 称取捣碎液100 g (实际含样品50 g) , 置250 ml容量瓶中, 加水至200 ml左右, 80℃水浴中提取0.5小时, 其间摇动数次。取出立即加入2 ml乙酸锌溶液和2 ml亚铁氢化钾溶液, 摇匀, 冷却, 定容, 过滤, 滤液备用。 (2) 吸光度的测定 用移液管准确吸取0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 ml葡萄糖标准溶液分别置于25 ml容量瓶中, 用蒸馏水补充至10 ml, 加3, 5—二硝基水杨酸溶液2.5 ml, 摇匀, 置沸水中煮5分钟, 取出后以流水冷却, 20分钟后比色, 用试剂空白调零, 用分光光度计在540 nm波长处测定吸光度值。以吸光度值作纵坐标, 葡萄糖标准溶液系列中葡萄糖含量 (mg) 作横坐标, 绘制标准曲线。 (3) 样品测定 用移液管吸取样液5 ml (样品中还原糖含量低时吸取7.5~10 ml) , 用蒸馏水补充至10 ml, 以下同标准曲线。 2 试验结果与分析 2.1 测定回归方程 标准溶液系列吸光度测定结果, 见表1。 根据以上测定结果计算得回归方程A=-0.0218+0.0393C, 方程中A为吸光度, C为葡萄糖量。相关系数r=0.9996。 2.2 回收率试验结果 在已知还原糖含量的样品液中加入2 mg标准葡萄糖溶液做回收率试验, 进行5次重复, 结果见表2。 由表2可知, 回收率为97.0%~105.0%, 5次回收率的平均值为101%, 说明该试验方法可以得到较好的分析结果。 2.3 复测定结果 对米拉品种马铃薯块茎还原糖含量进行20次重复测定, 结果见表3。 以上测定结果平均值为0.128%, 标准偏差0.004, 变异系数3.49%, 说明该方法具有较高的精密度。 2.4 样品测定结果 用以上方法对云南省农科院生物所马铃薯课题组正在中试的10个品种进行了还原糖的测定结果, 见表4。 2.5 样品液的制备 加入乙酸锌溶液和亚铁氢化钾溶液的作用是沉淀马铃薯块茎中的蛋白质, 以制备得到纯清样品液。经试验加入乙酸锌溶液和亚铁氢化钾溶液各2 ml, 可以达到较好的澄清效果。 2.6 显色剂3-5-二硝酸溶液的加入试验结果 需加入3, 5-二硝基水杨酸2 ml以上才能与样液中的还原糖反应完全, 本试验选择加入2.5 ml。 2.7 游泳反应时间的试验结果 煮沸反应时间需大于4分钟, 3, 5-二硝基水杨酸才能与样液中的还原糖完全反应, 并得到稳定的橘红色比色液。本试验选择5分钟。 2.8 颜色