液相色谱-质谱联用技术在药物分析中的应用.docxVIP

液相色谱-质谱联用技术在药物分析中的应用 高效液相色谱法（hplc或lc）是一种将液体溶剂用作流动相的色度技术。一般来说，在室温下操作时，可以直接分析不分解的化合物、极性化合物和大型化合物（包括蛋白质、茶多酚、糖苷、多聚物等），分析的范围广泛，不需要复杂步骤。据统计, 在已知化合物中有70%是不挥发性的, 所以在生命科学、医药领域等方面有广阔的应用潜力。 质谱是强有力的结构解析工具, 能为结构定性提供较多的信息, 是理想的色谱检测器, 不仅特异, 而且具有极高的检测灵敏度。串联质谱 (MS/MS) 是将一个质量选择的操作接到另一个质量选择的后面, 在单极质谱给出化合物相对分子量的信息后, 对准分子离子进行多极裂解, 进而获得丰富的化合物碎片信息, 确认目标化合物, 对目标化合物定量等。串联质谱与单级质谱相比, 能明显改善信号的信躁比, 具有更高的灵敏度及选择性, 其检测水平可以达到皮克 (pg) 级。 液相色谱-质谱/串联质谱联用是以HPLC为分离手段, MS为检测器的一门综合性分析技术, 它集LC的高分离能力与MS的高灵敏度、极强的定性专属特异性于一体, 成为药物研究中不可或缺的有效工具。随着各种离子化技术的不断出现, LC-MS联用在生物、医药等领域的地位越来越重要。 1 api接口探针 当前使用广泛的接口技术有:热喷雾 (TSP) , 等离子体喷雾 (PSP) , 粒子束 (LINC) , 大气压电离 (API) 和动态快原子轰击 (FAB)。API技术是当今质谱界最为活跃的领域, 它是一种常压电离技术, 不需要真空, 减少了许多设备, 使用方便, 因而近年来得到了迅速发展。API主要包括电喷雾离子化 (ESI) , 气动辅助点喷雾即离子喷雾离子化 (ISI) 和大气压化学离子化 (APCI) 3种模式。它们的共同点是样品的离子化在处于大气压下的离子化室内完成, 离子化效率高, 大大增强了分析的灵敏度和稳定性。ESI, ISI和APCI 3种电离方式同时作为LC-MS的接口。 大多LC-MS都要求有尽可能高的LC流速达到接口, 目前ISI接口的最佳流速可达到50~200 μl/min, 比原来提高了10~20倍。在柱子出口和ESI探针间加一个溶剂分离器, 可使柱流速从1ml/min减少到100μl/min进入接口探针而对响应无不良影响。 当样品有限时, 可应用在低于1μl/min流速下有效工作的纳 (nano) -ESI接口。有静态及动态两种nano-ESI接口, 静态nano-ESI装置常特殊应用于鉴定蛋白质, 而动态nano-ESI装置与毛细管电泳nano-LC微毛细管LC或毛细管电色谱联用, 流速常在30~1 000 nl/min。 2 检测方法灵敏度 药物分析研究中, 药物质量研究和药物代谢研究是其中重要的组成部分, 因样品含量很少, 分离、分析难度大, 要求检测方法灵敏度高, 精密、准确。色谱-质谱联用法为这些研究提供了强有力的分析工具, 显示了它在药物分析研究中的发展前景。 2.1 质谱条件的优化 史向国等人用LC-MS法鉴定抗生素新药必特螺旋霉素中的多组分, 实验结果得到10种螺旋霉素类衍生物, 并推断出化学结构, 通过与对照品的色谱、质谱对比得到验证。实验者认为LC-MS法是适合快速分析复杂大环内酯类抗生素的分析方法之一。由于很多微生物发酵产生的大环内酯类抗生素是同类衍生物的混合物, 所以LC-MS在大环内酯类抗生素的分析中发挥重要的作用;快速获得化学组分结构信息, 制定质量标准并指导其中单一组分的分离鉴定。 卢定强等利用LC-ESI-MS法对银杏叶样品进行了初步研究。得到了样品总离子流和选择离子流图, 及相应色谱峰的ESI-MS质谱图, 对其进行了解析, 鉴别出白果内酯及银杏内酯A、B、C、J。张皓冰等用HPLC-MS法测定制剂中麝香酮含量可同时实现麝香酮的定性和定量分析。在优化的HPLC-MS条件下观察到了[M+H]+峰及其特征碎片峰。ESI和APCI对M/2419作MS/MS全扫描质谱图有相同的相对分子质量及断裂方式。回收率102.5%, RSD≤2.76% (n=5) 。 2.2 苯乙苷类化合物的定量分析 中药鉴定学的中心任务是研究中药的品种和质量。目前, 中药鉴定学是中药现代化研究与产业化开发的一个技术平台。现代色谱、光谱及生物技术等先进分析手段逐渐应用于鉴定学中。王义明等采用LC/ESI-MS/MS方法对正品肉苁蓉及其习用品盐生Ⅰ肉苁蓉和管花Ⅰ肉苁蓉中的7种苯乙醇苷类 (Ⅱ) 化合物进行定性分析及相对含量测定。徐智秀等以反相高效液相色谱法分离了9种人参皂苷 (Ⅰ) , 利用三级四级杆质谱研究了9种Ⅰ的一级质谱 (主要给出相对分子质量信息) 和二级质谱 (提供碎片结构信息) 。通过它们的质谱图