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不同产地栽培铁皮石斛的多糖含量测定 以铸铁石斛为代表的“枫斗”石斛具有养胃、健脾、滋阴、清热的功效。传统认为，最好是的是含有粘液、重、轻、甜和无残留物的优质量。铁皮石斛的主要成分为石斛多糖,现代药理研究表明,石斛多糖具有增强机体免疫力、抗肿瘤、降血糖等多种活性。 自20世纪80年代末以来,随着铁皮石斛资源的日益枯竭以及市场的不断拓展,市场供需矛盾日益加大,同属其他石斛品种被不断开发作为铁皮石斛的替代资源,据笔者调查目前市场上流通常见的种类有齿瓣石斛、杯鞘石斛、兜唇石斛、晶帽石斛等。由于药用石斛野生资源日渐匮乏,近年来石斛的人工栽培也愈来愈受到人们的关注,成为保障石斛原料来源的重要途径。当前石斛类药材在云南的种植发展较快,但各地种植的品种却不尽相同。西双版纳地区作为云南省石斛主要种植区之一,种植品种主要包括铁皮石斛、齿瓣石斛和兜唇石斛等。笔者采用苯酚-硫酸法对不同产地来源、不同品种来源“枫斗类”石斛植物的水溶性多糖含量进行研究,为今后药用石斛资源的评价和开发利用,以及栽培推广提供依据和参考。 材料表面 方法 结果 1. 方法研究 发酵时间对石斛多糖含量的影响 铁皮石斛原产浙江、云南、福建等地,20世纪80年代在浙江地区人工试管苗繁殖成功。近年来开始在云南西双版纳及其周边地区种植。西双版纳自然气候条件优越,该地区种植铁皮石斛通常1-1.5年即可采收,不仅石斛植物的年生长量较大,种植周期较短,而且品质较好。本研究结果表明西双版纳(景洪市、勐海县、勐腊县)种植1年的铁皮石斛多糖含量均高于25.0%,达到中国药典标准。云南屏边和贵州遵义的样品多糖含量相对较低。本研究结果可为今后铁皮石斛的南移栽培推广提供一定的依据和参考。 齿瓣石斛加工成“枫斗”后与铁皮石斛“枫斗”在形态上相似,市场上常作为铁皮石斛的替代品,其价格仅次于铁皮石斛。从多糖含量分析,种植相同时间,同一产地的齿瓣石斛组培苗的多糖含量高于铁皮石斛。种源为野生来源的齿瓣石斛多糖含量要高于组培苗来源的样品,除种植地生态环境条件外,种苗的差异也是造成石斛多糖含量品质差异的主要原因之一,这与其他文献报道一致。 本实验的测定结果表明,作为“枫斗类”药材使用的铁皮石斛、齿瓣石斛、兜唇石斛和晶帽石斛,其石斛多糖含量有较大差异,各品种石斛平均多糖含量依次为:兜唇石斛(47.72%)齿瓣石斛(39.67%)铁皮石斛(30.06%)晶帽石斛(27.98%)。可见齿瓣石斛和兜唇石斛这2个品种在石斛多糖的开发利用上具有较好的前景。至于这些品种的药理作用与铁皮石斛是否完全一致,尚有待于进一步研究。 1. 实验仪器和仪器 旋转蒸发器R-210(瑞士布奇);TU-1901新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);系列分析天平AB135-S、PL203(METTLER TOLEDO上海有限公司)。葡萄糖、苯酚、浓硫酸、石油醚、甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、丙酮、正丁醇等试剂均为分析纯。 2. 齿瓣石斛pax 共38份,分别采自云南景洪市、勐腊县、勐海县、普洱市、屏边县、瑞丽市、龙陵县,贵州遵义,以及浙江金华,经本所郭顺星研究员鉴定为铁皮石斛Dendrobium.offi cinale Kimura et Migo、齿瓣石斛D.devonianum Paxt、兜唇石斛D.aphyllum(Rohb.)C.E.Fisch、晶帽石斛D.crystallinum Tchb.F、杯鞘石斛D.gratiosissimum Rchb及短棒石斛D.capillipes Rchb。栽培时间均为1年。于采收期采集鲜石斛茎,采集时间为2008年12月至2009年3月。 1. 小段中不同部位的冷却 精确称取石斛的新鲜样品若干,截成1cm左右的小段,60℃烘干至恒重,冷却后称量。折干率=M2/M1,式中:M1为新鲜样品的重量,M2为干燥后干品的重量。 2. 脱蛋白的提取 新鲜石斛切片,60℃烘干,粉碎,过60目筛,备用。精密称取石斛干燥后粗粉10g,加入石油醚100m L,回流提取1h,过滤,脱脂;再用80%乙醇200m L回流提取1h,趁热过滤,除去脂溶性成分,残渣加入蒸馏水500m L回流提取2次,每次2h,趁热过滤,滤液减压浓缩至60m L,用0.1%活性炭脱色后,加入95%乙醇至溶液含醇80%,静置过夜,分出沉淀物溶于蒸馏水,Sevag法脱蛋白。上清液如上述重复醇沉,沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤3次。将沉淀按以上步骤再次脱色、醇沉,得到多糖精制品于60℃烘干备用。 2.1 容量瓶溶液配制 精密称取105℃干燥恒重的标准葡萄糖100.00mg,置100m L容量瓶中,加蒸馏水适量使溶解,稀释至刻度,摇匀。精密吸取10m L置100m L容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,每1m L含葡萄糖0.1mg。 2.2 供试溶