15株einerna抗球虫药的抗药性鉴定.docxVIP

15株einerna抗球虫药的抗药性鉴定 自levie发现磺胺类药物具有抗凝剂作用外，gramburg首次使用磺酰胺磷酸酯连续药物预防鸡球虫。使用抗球虫药防治鸡球虫病,对减轻其危害、确保养鸡业的发展起到了巨大作用。然而,早在1945年,美国就从鸡场分离出了怀疑为对磺胺类药有抗药性的虫株,1954～1955年又从鸡场分离出对磺胺类药抗药和无反应的虫株。此后,英国、法国、日本、匈牙利、巴西和阿根廷等国先后对鸡场球虫的抗药性进行了大量调查研究,迄今已从养鸡现场分离出了几乎对所有使用过的抗球虫药有抗药性的虫株,而且表现一定程度的交叉抗药性,并发现养鸡现场抗药虫株的发生率很高[6,7,8,9,10,11,12,13,14]。 球虫的抗药性使抗球虫药的使用年限大大缩短,防治效果降低甚至失效。有时即使提高药物浓度,防治效果及然不佳,导致临床或亚临床球虫病的发生,给养鸡业带来巨大的经济损失。由于球虫疫苗的研制和应用尚存在许多关键性问题未得到解决,近期还不可能依靠免疫达到控制球虫病的目的,因此,在未来相当长时间内,防治球虫病似乎仍须依赖抗球虫药物,而抗药性则是鸡球虫病防治对策中最严重的一个问题。 在我国,杜金梅和王俊秀报道了台湾Eimeria tenella对数种抗球虫药的抗药性;在其它地区,药物防治效果不佳乃至失败的事例亦屡见不鲜,人们并将其归因于球虫抗药性,但并未见有实验证实球虫抗药性的报道。为了了解我国鸡球虫抗药性的发生和流行情况,为养鸡生产中正确选择高效抗球虫药、制订合理用药方案提供科学依据,并为现场监测球虫抗药性提供切实可行的判定方法和标准,我们对采自12个省区的15株E.tenella对5种抗球虫药的抗药性进行了调查研究。 1 材料和方法 1.1 子球虫抗药性试验 试验用虫株分别采自12个省区养鸡现场的鸡粪或盲肠,个别虫株由有关研究室提供。各虫株均在上述饲养管理条件下,实验室内经鸡体传代、增殖、纯化1～3代。收集无其它病变的鸡盲肠及其内容物,用含1%胰蛋白酶pH 8.0生理盐水匀浆,39℃作用30 min,60目金属筛过滤,沉淀物加常水离心(3 000 r·min-1,10 min)洗2～3次,饱和盐水漂浮法(3 000 r·min-1,5 min)收集卵囊,加常水离心(3 000 r·min-1,10 min),洗2次,2.5%重铬酸钾液中28℃通气培养48 h,使孢子化,4℃保存备用。试验用虫株均根据卵囊采集部位、肉眼病变、卵囊形状、大小、卵囊形状指数、潜隐期和孢子化时间鉴定为E.tenella。 在鸡14日龄时,分别取各虫株的孢子化卵囊,离心(3 000r·min-1,10 min)水洗3次,去除重铬酸钾,重悬定容,血球计数器计数,调整至每毫升含孢子化卵囊1×106个,每只鸡经口一次接种各相应虫株孢子化卵囊1×105个(0.1 mL)。 以最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变记分减少率(RLS)和相对盲肠卵囊产量(ROP)3项参数指标综合判定球虫对药物的抗药性(或敏感性),具体判定标准为:+:轻度抗药;++:中度抗药;+++:严重抗药;一:敏感。①POAA=(感染用药组GSR—感染不用药对照组GSR)/(不感染不用药对照组GSR一感染不用药对照组GSP)×100%。GSR=笼末重/笼初重。POAA≤50%:有抗药性;50%:无抗药性。②(RLS=感染不用药对照组平均病变记分一感染用药组平均病变记分)/(感染不用药对照组平均病变记分)×100%。RLS≥50%:无抗药性;50%:有抗药性。③ROP=感染用药组平均卵囊百万数/感染不用药组平均卵囊百万数×100%。ROP≥15%:有抗药性;15%:无抗药性。 2 结果 2.1 鸡的致病性 试验观察到,不同地区虫株对鸡的致病性显著不同,其中广州的2个虫株和四川虫株对鸡的致病力最强,每只鸡感染1×105个卵囊,死亡率分别为83.3%,83.3%和66.7%。鸡只死亡多发生在感染后第5～7d之间,约占总死亡数97%,死前均呈现精神萎靡,翅下垂,闭眼缩颈,呆卧昏睡,颤抖及血便等典型症状。 2.2 用三个参数指数来评估同一区域内寄生虫的抗药性，结果是不均匀的 当以POAA,RLS和ROP分别评价1个药物的效力时,同一虫株对同种药物的反应存在不一致性,结果见表1。 2.31 虫株对药物的敏感性试验 以最适抗球虫活性百分率、病变记分减少率和相对卵囊产量3项指标综合评价15个虫株对莫能霉素、氨丙啉、克球粉、氣苯胍和杀球灵的敏感性试验表明,完全敏感虫株分别占20%,33.3%,46.7%,46.7%和100%,具有不同程度抗药性的虫株分别占80%,66.6%,53.3%,53.3%和0(表2)。 2.4 利用输出虫株检测 本试验所检测的5种药物,除杀球灵外,其它4种药物无1种能完全控制所检测的1