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小箍香对肝纤维化及脂质过氧化的影响 肝纤维（hf）是指肝脏纤维纤维异常增生的病理过程。它通常是持续肝脏损伤或促进纤维分泌的结果。它不仅是不同慢性肝炎病理改变的共同基础，也是慢性肝炎通往肝硬化的唯一途径。研究发现,氧化应激、脂质过氧化可能在肝纤维化损伤过程中起重要作用。肝纤维化是一种可逆的病理改变,在肝纤维化阶段进行合理治疗可以逆转肝纤维化的进程,从而达到缓解甚至治愈肝纤维化的目的。本研究以复合因素法复制肝纤维化大鼠模型,以中药小茴香进行治疗性干预,对该药护肝作用和可能的作用机制进行了初步研究,为临床应用和相关药物研发提供实验依据。 1 材料和方法 1.1 动物饲养环境 取清洁级Wistar大鼠100只,雌雄各半,平均体重(200±20) g,由新疆医科大学实验动物中心提供。大鼠自由饮水进食,每12小时昼夜交替饲养,动物饲养环境温度20℃,相对湿度(50±10)%。小茴香由医院购买,复方丹参片为广州白云山中药厂出品(批准文号2009A015);四氯化碳(CCl4)分析纯、MDA试剂盒、HYP试剂盒、SOD试剂盒、考马斯亮兰试剂盒均购自南京建成生物工程公司。 1.2 实验方法 1.2.1 分组、干预方法 大鼠100只,随机取12只设为正常对照组,余为造模组,采用复合因素法造模;模型复制成功后随机分为小茴香低、中、高剂量组与复方丹参组,并设模型对照组,每组12只,以相应药物灌胃干预,小茴香低、中、高剂量组剂量分别为0.54、1.08、2.16 g/kg,复方丹参组剂量按人鼠等效剂量换算法定为1.02 g/kg,每日1次,干预时间8周。 1.2.2 抗氧化酶活性测定肝脏功能 实验终结时,乙醚法麻醉后下腔静脉取血,分离血清后部分用全自动生化分析仪检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、血清总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)含量,部分血清-20℃冻存;取肝脏洗净-70℃冻存,匀浆后与血清一同以生化法检测羟脯氨酸(HYP)与丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,具体操作过程按试剂盒说明书进行;部分肝组织以4%中性甲醛固定,石蜡包埋保存,制备切片,HE常规染色,光镜下观察并摄片;肝纤维化分期按照文献的标准进行分期。 1.3 统计学处理方法 使用统计软件SPSS 13.0进行数据处理,所有数据中计量资料用均数±标准差(xˉ±s)(xˉ±s)进行统计描述,多组数据间比较采用单因素方差分析,纤维化程度以等级资料表示,采用Ridit分析,检验水准α=0.05。 2 结果 2.1 复方人参组—大鼠一般情况 造模大鼠用四氯化碳(CCl4)干预后,可见精神萎靡,出现消瘦、厌食、大便稀等情况,并随干预时间延长逐渐加重,造模过程中死亡22只;而经以不同剂量小茴香干预后,上述情况明显改善,复方丹参组有一定好转;正常对照组生长良好,无异常。 2.2 小戊香对肝湿重、肝指数的影响 模型对照组肝湿重与肝指数较正常对照组显著升高(P0.01);经小茴香干预后,小茴香各剂量组的肝湿重与肝指数较模型对照组显著降低(P0.05);复方丹参组肝湿重与肝指数亦显著低于模型对照组(P0.05),见表1。 2.3 复方有效作用对肝组织结构的影响 HE染色显示:正常对照组肝细胞多呈单核,大小正常,肝小叶网状纤维完整,整齐,分界清楚,无炎性细胞浸润;肝细胞索以肝小叶中央静脉呈放射状排列(图1a);模型对照组肝组织部分肝小叶失去正常结构,肝细胞索排列紊乱,并有炎性细胞浸润(图1b);小茴香各剂量组和复方丹参组可见少量肝细胞呈脂肪变性,肝组织结构完整,无假小叶形成(图1c～f)。肝纤维化病变程度比较显示:模型对照组肝纤维化病变程度较正常对照组有明显差异(P0.01);小茴香各剂量组和复方丹参组与模型对照组比较肝纤维化病变程度均有明显差异(P0.05),见表2。 2.4 tp、alb含量 模型对照组ALT、AST活性较正常对照组显著升高(P0.01),TP、ALB含量显著降低(P0.01);小茴香各剂量组与复方丹参组ALT、AST活性均显著低于模型对照组(P0.01),而TP、ALB含量均显著高于模型对照组(P0.05,P0.01),见表3。 2.5 血清及肝sod活性 模型对照组肝HYP、血清及肝MDA含量与正常对照组比较均显著升高(P0.01),血清及肝SOD活性显著下降(P0.01);小茴香各剂量组和复方丹参组肝HYP、血清及肝MDA含量均显著低于模型组(P0.05),而血清和肝SOD活性显著高于模型组(P0.05～0.01),见表4。 3 抗肝纤维化药活性研究 肝纤维化是肝脏对多种原因慢性损伤的病理修复反应,以肝脏细胞外基质代谢失衡、过度增生沉积为特征。虽然不同肝病的致病机制不完全相同,但发生的最终共同途径是肝星状细胞(HSC)的激活,转化为肌成纤维细胞,