薯皂苷对大鼠非酒精性脂肪肝的防治作用.docxVIP

薯皂苷对大鼠非酒精性脂肪肝的防治作用 酒精性肝炎（nad）包括纯肝胆红素、脂肪性肝炎和脂肪性肝硬化。肥胖者的发病率为50%，其中约30%的人逐渐发展为脂肪性肝炎和硬化。目前主流机制认为其是由于脂质代谢紊乱、氧化应激过高、胰岛素抵抗等因素引发的。我们研究薯蓣皂苷对大鼠NAFLD的预防及治疗作用, 以期为临床应用提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 动物模型的构建和组成 1.2 试剂 1.3 检测方法 1.4 统计方法 2 结果 2.1 nafd模型的构建 2.3 血脂和肝中脂质 2.4 胰岛素阻力指数、tnf-i和脂联索 2.5 氧气反应指标 2.6 肝脏疾病的改变 3 大鼠肝脏脂联素水平变化 本研究通过高脂饲料饲养SD大鼠12周, 成功构建了SD大鼠NAFLD模型.该模型的代谢特征为IR、高氧化应激、高脂血症、血清转氨酶升高.与其他研究脂肪肝的动物模型相比, 高脂饮食诱导NAFLD大鼠模型与人类相似, 造模方法简便易行, 模型形成率高.故本研究采用的是单纯高脂饮食来构建动物NAFLD模型。目前多数研究认为NAFLD发病机制涉及到以下几个方面: (1) 脂质代谢紊乱; (2) 胰岛素抵抗; (3) 氧化应激; (4) 炎症因子TNF-a紊乱等。其中“二次打击学说”就涵盖了胰岛素抵抗及氧化应激两方面的机制。另外有研究显示30%~60%的患者有血脂异常, 尤其是高TG症, 血脂异常, 引起脂质沉积, 可能与以下原因有关: (1) 脂质摄入异常; (2) 线粒体功能障碍; (3) 肝细胞合成游离脂肪酸和TG增多; (4) 极低密度脂蛋白合成不足, 导致甘油三酯运出干细胞减少。薯蓣皂苷是由秦岭地区提取的8种水溶性甾体皂苷, 研究证实薯蓣皂苷具有扩张心肌血管、增加血液供应, 能够显著调节血脂, 抗动脉粥样硬化, 另外, 薯蓣皂苷能激活体内的超氧化物歧化酶 (SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px) , 清除体内的游离氧自由基, 阻止脂肪酸氧化障碍作用。 本研究证实薯蓣皂苷可明显降低血浆胆固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白, 肝脏脂肪变性逆转, 肝组织中脂质水平明显下降。同时同时, HOMA-IR明显减低, 脂联素水平显著上升TNF-α及氧化应激指标SOD、GSH-Px、MDA均有显著改善并具有统计学意义 (P0.05) 。提示薯蓣皂苷可能通过改善IR、纠正低脂联素血症和脂代谢紊乱及氧化应激等多种途径逆转大鼠NAFLD模型的肝脂肪变性和肝功能异。 薯蓣皂苷作为纯中药制剂, 其是如何降低肝脏脂质、如何降低胰岛素抵抗, 升高脂联素水平的分子机制尚不明确, 因此其可作为今后的研究方向之一。 60只SD大鼠购自中科院上海实验动物中心, 雄性, 平均体质量 (159.63±12.34) g。随机分为3组, 各组间体质量无差别, 正常组以普通饲料喂养, 对照组予高脂饲料 (普通饲料中加2%胆固醇和10%猪油配成) , 薯蓣皂苷组在对照组给药的基础上以薯蓣皂苷灌胃, 2 mg·kg-1·d-1, 1次/d, 正常组和对照组用等量的生理盐水灌胃。大鼠自由进水和进食, 于实验12周后隔夜禁食, 次日以水合氯醛 (药盒批号020911) 50 mg/kg腹腔内麻醉后, 股动脉采血处死。 胆固醇购自上海化学试剂公司, 猪油由市场生猪油炼制, 薯蓣皂苷由东盛科技公司馈赠, 商品名维奥欣 (批 。胰岛素放射免疫试剂盒购自上海放射免疫分析技术研究所;大鼠TNF-α测定试剂盒 (ELISA法) 购自上海森雄科技有限公司;脂联素放射免疫试剂盒为美国Lin-co Research公司提供。丙二醛 (MDA) 、超氧化物歧化酶 (SOD) 、脂质过氧化物 (LPO) 、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px) 试剂盒均购自南京建成, 高脂饲料:由10%熟猪油、8%胆固醇、2%胆盐和80%普通饲料组成。 (1) 血和肝匀浆中TG、TC、HDL-C、LDL-C、空腹血糖 (FPG) 、谷丙转氨酶 (ALT) 、谷草转氨酶 (AST) 等在全自动生化分析仪上测定; (2) 空腹胰岛素 (FNS) :放免法测定, 计算胰岛素抵抗指数 (HOMA-IR) =[空腹血糖 (FPG) ×FNS]/22.5; (3) 氧化应激指标, 血TNF-α采用ELISA法测定; (4) 肝指数:称重肝重与体质量, 计算肝重/体质量的比值, 即为肝指数; (5) 肝脂质测定:取适量肝组织, 在液氮中研成粉末, 称重后加入氯仿-甲醇 (2∶1) 抽提脂质, 离心后取上清测定其TG、TC含量, 结果以mg/g肝组织表示; (6) 肝组织病理检查, 常规石蜡包埋、切片, 苏木精-伊红染色。光镜下观察。每张切片观察6个视野, 对肝脂肪变性程度进行分级、评分。含脂滴细胞数/总细胞数比值1/3