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绒山羊mnr基因多态性及其表达分析 0 绒山羊mtnr基因多态性 【研究意义】内蒙古白鹿羊分为阿拉巴斯羊、阿拉森羊和二郎山羊，主要分布在内蒙古西部的优势羊产区。阿尔巴斯型白绒山羊综合品质最好,因所产羊绒被誉为“纤维宝石”而畅销全球。褪黑激素(melatonin,MTN)主要是由哺乳动物脑部松果体分泌的一种吲哚类激素,其分泌主要受光照影响,表现出明显的“昼低夜高”的节律变化。MTN通过与其受体(melatonin receptor,MTNR)结合来发挥其生物学功能,具有广泛的生理活性,其功能之一就是调控毛皮动物的毛发生长发育。因此,在MTNR基因水平上研究阿尔巴斯白绒山羊的遗传多态性,寻找可用于辅助选择的分子标记,有助于绒山羊产绒经济性状的高效选育和更好地开发利用该品种。【前人研究进展】绒山羊毛被生长的周期性受光周期影响,其实质是通过松果腺分泌的MTN的控制。长日照可抑制MTN的合成,而光照长度缩短时就会减轻其抑制,MTN水平上升,催乳素(prolactin,PRL)水平急剧下降,诱发绒山羊绒毛开始生长。由此可见,绒山羊绒毛生长与自然光照长度、MTN及PRL分泌紧密相关。研究表明,体外培养下,MTN与PRL均具有促进毛囊延伸的作用,外源MTN埋植于动物皮下可促进绒山羊在非产绒季节和产绒季节长绒,并能显著增加产绒量。MTNR属于G蛋白耦联受体家族,根据MTNR与2-125I-MTN结合的药理和动力学特性可将它们分为高亲和性的MTNR1型受体和低亲和性的MTNR2型受体。根据蛋白质同源性还可将MTNR1型受体分为MTNR1a、MTNR1b、MTNR1c共3种亚型,目前在哺乳动物中尚未发现MTNR1c亚型,只发现MTNR1a、MTNR1b两种亚型。小鼠MTNR1a基因长度大于14 kb,编码一种含353个氨基酸的蛋白质,其结构由两个外显子和一个大于13 kb的内含子构成,其中外显子1编码的范围包括5′非翻译区和一直到第一个细胞内环的编码区,外显子2则包括3′非翻译区及剩余的编码区。MTNR1b是一单拷贝基因,其具有多个转录起始位点。人的MTNR1b基因编码为长约362个氨基酸的蛋白质,MTNR1b基因结构与MTNR1a相似,由一个长度大于8 kb的内含子将两个外显子隔开,内含子剪切位置在第一个细胞质环处。赵艳红等克隆了绒山羊MTNR1a基因第1和2外显子的序列,与报道的绵羊、人、鸡和鼠的外显子2序列同源性均较高。赵苗研究了MTNR1a基因的多态性,表明MTNR1a-4-577基因座对内蒙古绒山羊的产羔性状有显著影响,MTNR1a-4-589基因座对羔羊初生体重有显著影响,但没有发现对产绒性状和体重有显著影响的SNP。【本研究切入点】MTN和PRL协同对毛发生长发育的重要影响,因此MTNR基因和PRL基因被认为是影响产绒或产毛性状的重要功能基因,推测MTNR基因多态性很有可能与产绒性状相关。但截至目前,MTNR基因多态性的研究主要集中在MTNR1a基因,还未见绒山羊MTNR1b基因遗传变异及其与产绒性状关系的研究报道。【拟解决的关键问题】本研究以绒山羊MTNR(MTNR1a和MTNR1b)基因为候选基因,在前人已有研究工作的基础上,进一步挖掘其未被发现的基因多态信息;寻找阿尔巴斯白绒山羊MTNR基因遗传变异规律及其与产绒性状相关联的标记位点,以进一步提高绒山羊的生产性能,对绒山羊品种的选育与改良提供借鉴。 1 白绒山羊种羊场采集和研究测定 血液样品于2011年4月底在鄂托克旗内蒙古白绒山羊种羊场采集,PCR-SSCP试验于2011年7—12月在内蒙古自治区农牧业科学院生物中心完成。 1.1 材料表面 1.1.1 血样的采集和保存 应用随机抽样法在内蒙古白绒山羊种羊场采集阿尔巴斯型白绒山羊2个育成母羊群、3个成年母羊群共5个羊群的290份血样。所采血样均为6 mL,加入ACD抗凝,于-20℃保存。采血样的同时记录试验羊体重、产绒量、绒细度和绒长度等生产性状指标。 1.1.2 scp索引 1.2 方法 1.2.1 基因组dna完整性测定 本研究绒山羊血液DNA的提取参照上海生工产品UNIO-10血液基因组提取试剂盒提供的方法,并稍加改进。用分光光度计按1OD260=50μg测量基因组DNA的含量,并通过0.7%琼脂糖电泳凝胶检测DNA的完整性。合格的DNA样品用TE稀释至终浓度50 ng·μL-1后于-20℃保存。 1.2.2 pcr反应条件 PCR总反应体系为25μL,模板DNA 2μL、10×Buffer(100 mmol·L-1Tris-HCl p H 8.0)2.5μL,Taq酶0.5μL(2 U),d NTP(200μmol·L-1)1.0μL,引物(5 pmol·μL-1)2.0μL,然后用双蒸水补至25μL。反应条件:95℃