顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法测定酱油中挥发性风味成分.docxVIP

顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法测定酱油中挥发性风味成分 柴油来自中国，是中国的重要原材料之一。我国酿造酱油的年产量为500万吨,占全世界55%以上。然而日本酱油的质量为上乘,其国际竞争力强,出口量远高于我国。要提高我国酱油的国际竞争力,必须提高酱油的质量。改善风味是提高酱油质量很有效的手段,而我国在酱油香味方面的研究极少,除王林祥等采用同时蒸馏萃取(simultaneous distillation/extraction, SDE)法提取,以气相色谱-质谱(GC-MS)定性分析了酱油的挥发性成分外,其他对酱油挥发性风味成分的分析未见报道。因此需要建立一种快速有效的方法对其中的挥发性风味成分进行定性定量分析。 分析液体食品中的香味物质,通常要对香气成分进行浓缩预处理。传统的浓缩预处理方法有液-液萃取法(liquid-liquid extraction)、顶空法(head space sampling)、吹扫捕集法(purge and trap)、同时蒸馏萃取法和固相萃取法(solid-phase extraction)。这些方法都不同程度地存在某些缺点,或费用太高,或样品量过多、耗时过长,或使用的是对人体有害的昂贵的有机溶剂,对操作者造成潜在的危害,还可能在浓缩过程中丢失挥发性物质。 与传统的风味物质抽提技术相比,固相微萃取(SPME)简便、快速、经济安全、无溶剂、选择性好且灵敏度高,可直接与气相色谱-质谱、高效液相色谱、毛细管电泳仪等联用,集采样、萃取、进样于一体,大大加快了分析检测的速度。 本文优化了顶空固相微萃取法(HS-SPME)参数,探讨了HS-SPME用于分离酱油中香气物质的可行性,建立了该样品处理法与GC-MS联用快速测定酱油中香气物质的分析方法,并用HS-SPME-GC-MS方法对酱油样品的香气物质进行了定性定量测定。 1 实验部分 1.1 萃取装置和流程 气相色谱-质谱联用仪:Trace MS(美国Finnigan公司);色谱柱:DB-WAX弹性石英毛细管柱(30 m×0. 25 mm×0. 25 μm,美国Supelco公司);Turbo Matrix TD热脱附进样器(美国Perkin Elmer公司)。萃取装置:SPME手动进样手柄、萃取头(85 μm PA、100 μm PDMS、75 μm CAR/PDMS、65 μm PDMS/DVB、50 μm DVB/CAR/PDMS)(美国Supelco公司)、顶空进样瓶(15 mL,中国安谱公司)、RCT-Basic加热磁力搅拌器(日本岛津公司)。 酱油样品:市售高盐稀态酱油(龟甲万万字大豆酱油)。 1.2 老化2h 萃取头的老化:萃取头第一次使用时在气相色谱进样口分别于275 ℃下老化 5 h、250 ℃下老化 3 h,第二次以后使用时分别在上述温度下老化 1 h 和30 min。 萃取条件:涂层厚度为85 μm聚丙烯酸酯(PA)萃取纤维头,于45 ℃、250 g/L NaCl条件下对酱油样品顶空吸附40 min,于250 ℃下解吸2 min后进行GC-MS分离鉴定。 1.3 升温速率升温 气相色谱条件:DB-WAX色谱柱;载气为He,流速1 mL/min;程序升温:起始温度40 ℃,保持 5 min,以5 ℃/min 升温速率升至200 ℃,保持15 min;汽化室温度250 ℃;分流比30∶1。 质谱条件:电子轰击电离(EI)离子源,电子能量70 eV,发射电流200 μA,电子倍增器电压350 V,离子源温度200 ℃,接口温度250 ℃,质量范围33～450 u,扫描速度0.2 s/scan。 1.4 测定正匹配比的确定 定性:实验数据处理由Xcalibur软件完成,未知化合物经计算机检索的同时与NIST谱库(107 000 个化合物的数据)和Wiley谱库(320 000 个化合物的数据,Version 6.0)相匹配,只有当正反匹配度均大于800(最大值为 1 000)的鉴定结果才予以确认。 定量:选择 2-辛醇为内标,其在酱油中的最终质量浓度约为45.6 mg/L,测定酱油样品中常见的几种代表性酸类、酯类、酚类和醛类物质对 2-辛醇的相对响应因子。酱油样品中鉴定的醇类物质以与 2-辛醇质量浓度之比计算,酸类、酯类、酚类和醛类物质的质量浓度以相应的真实物质或结构相近的物质的相对响应因子计算。除醛外,其他的羰基化合物和杂环化合物以醛类物质的相对响应因子计算。 2 结果与讨论 2.1 挥发性成分的萃取 按照聚合物的极性,萃取头的固定相涂层可分为3大类:第一类为极性涂层,如聚丙烯酸酯(PA)、聚乙二醇(PEG),适于极性化合物的萃取,已用于有机磷农药、废水中有机物、食品中风味物质等的分析检测;第二类为非极性涂层,如聚二甲基硅氧烷(PDMS),适于